无机磷检测试剂盒(米吐尔钼蓝微板法)

无机磷检测试剂盒(米吐尔钼蓝微板法)
产品简介：
血清中的无机磷(Inorganicphosphorous)主要由H2PO4-和HPO42-两种磷酸根阴离子组成，上述阴离子在不同的pH环境下能快速相互转换。在pH7.4血清中两种磷酸根阴离子浓度比例为1:4，在酸中毒环境下二者浓度约为1:1，在碱中毒环境下二者浓度比例为1:9，在pH4.5尿液中浓度比例为100:1。WHO推荐的常规检测方法为比色法，我国卫生部临检中心推荐的常规方法为硫酸亚铁钼蓝比色法和米吐尔钼蓝比色法。

无机磷检测试剂盒(米吐尔钼蓝微板法)利用无机磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵，后者被米吐尔还原成蓝紫色的复合物，通过酶标仪测定650nm处吸光度，根据公式计算出无机磷含量。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
        
自备材料：
1、96孔板
2、恒温箱或水浴锅
3、酶标仪

操作步骤(仅供参考)：
1、(选做)制备样品：
①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃
冻存，用于Pi的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于Pi
的检测。
③高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的Pi，可以蒸馏水稀释。
④(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的Pi含量。
2、配制磷标准工作液：取适量的磷标准(1mg/ml)，按磷标准(1mg/ml)：标准品稀释液=1:24的比例稀释，即获得磷标准工作液(1.292mmol/L)，-20℃冻存，用于Pi的检测。
3、配制米吐尔钼蓝显色工作液：取1支35mg的米吐尔，充分溶解于5mlPiAssaybuffer，即为米吐尔钼蓝显色工作液。4℃避光保存，一般建议3天内用完。
4、Pi加样：按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，小心混匀。如果样品中的无机磷浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测能设置2平行孔，求平均值。
5、Pi测定：混匀，37℃孵育10min，以空白调零，酶标仪650nm处测定，读取标准孔、测定孔的吸光度(即为A标准，A测定)。

计算：
血清、血浆中无机磷计算公式：磷(mmol/L)=(A测定/A标准)×1.292组织中磷计算公式：磷(mmol/mg)=(A测定/A标准)×1.292/待测样品蛋白浓度(mg/L)式中：A测定=待测管的吸光度A标准=标准管的吸光度N=尿液稀释倍数单位换算：mg/dl=mmol/L/0.323

注意事项：
1、米吐尔钼蓝显色工作液配制后，尽快使用，放置过久会导致正常血清液产生轻度浑浊。
2、如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

附录1：利用本法检测血清白蛋白比值倒置的样品时，易导致浑浊，可对样品进行取蛋白处理。操作如下：取0.1ml待测血清，加入0.9mlPi去蛋白试剂，充分混匀，低速离心，取上清液0.05ml。磷标准工作液(1.292mmol/L)同样进行处理，其余同上述操作。

附录2：参考标准曲线范围：测定磷标准在1.292mmol/L时，通过分光光度计测定其吸光度多在0.04~0.1之间(以空白调零)。测定磷标准在0.1615、0.323、0.646、0.969、1.292、2.584、5.168mmol/L时吸光度，根据测算浓度在0~0.5mmol/L之间及在5.168mmol/L时其结果不可靠