维生素C检测试剂盒(铜氧化微板法)

维生素C检测试剂盒(铜氧化微板法)
产品简介：
维生素C(VitaminC)又称L-抗坏血酸，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素，在生物体内维生素C是一种抗氧化剂，为酸性己糖衍生物，是稀醇式己糖酸内酯，保护身体免于自由基的威胁，同时也是一种辅酶，其广泛的食物来源为各类新鲜蔬果，Vc有L-型和D-型两种异构体，只有L-型的才具有生理功能，还原型和氧化型都有生理活性。

维生素C检测试剂盒(铜氧化微板法)检测原理是维生素C的分子结构中具有共轭双键，在酸性溶液中243nm处有大吸收峰，在中性或碱性条件下大吸收峰转移至265nm处，利用铜离子消除背景差异，可用酶标仪直接测定样品中的维生素C含量，主要用于植物组织中的维生素C(抗坏血酸)的检测。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
1、蒸馏水
2、离心管或试管
3、离心机
4、水浴锅或恒温箱
5、96孔板
6、酶标仪

操作步骤(仅供参考)：
1、稀释组织匀浆液：按组织匀浆液(10×)：蒸馏水=1：9的比例稀释，获得1×组织匀浆液。
2、制备样品：取待测材料如青菜、水果以及其他组织等，清洗擦干，准确称量5g，加入研磨器内，加入少量1×组织匀浆液，研磨碎，留取上清，再次用1×组织匀浆液研磨，后一并倒入10ml离心管，补充1×组织匀浆液至10ml，充分混匀，10000g离心5min，取0.05ml上清液，即为待测液；液体样品直接检测或稀释后进行检测。

3、配制系列VitaminC标准：取VitaminC标准(1.2mg/ml)，用蒸馏水稀释至12μg/ml，4℃保存备用，取干净离心管或试管，用VitaminC标准(12μg/ml)按下表进行操作，依次稀释。
4、VitaminC加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的VitaminC含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测能设置2平行管，求平均值。
5、VitaminC测定：混匀，以空白调零，酶标仪测定265nm处标准孔、测定管Ⅰ、测定管Ⅱ的吸光度。

计算：以系列标准VitaminC(1.2、2.4、3.6、4.8、6μg/ml)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程，以测定管的吸光度代入回归方程求得维生素C含量。

样品中维生素C含量(μg/5g)=(AⅠ－AⅡ)×N×6/K液体中维生素C含量(μg/待测样品ml数)=(AⅠ－AⅡ)×N×6/K式中：AⅠ=测定管Ⅰ的吸光度AⅡ=测定管Ⅱ的吸光度N=待测样品稀释倍数K=标准曲线斜率

注意事项：
1、上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。
2、待测样品如不能及时测定，应置于2~8℃保存，3天内稳定。
3、如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

附录：参考标准曲线范围：测定VitaminC标准(1~5号)在1.2、2.4、3.6、4.8、6μg/ml时，通过分光光度计测定其吸光度多0.1~0.95之间，其标准曲线如下：

注意：由于检测仪器和操作手法等条件的不同，参考值范围会有波动，该值仅供参考，对于要求精确计算VC含量的，可以采用标准曲线进行多点重复测定；根据测定经验显示，标准品浓度在0.6μg/ml以下以及24μg/ml以上，标准曲线会有偏差。