葡萄糖检测试剂盒(Folin-Wu微板法)

葡萄糖检测试剂盒(Folin-Wu微板法)
产品简介：
葡萄糖(Glucose,Dextrose，Glu)又称玉米葡糖，简称葡糖，化学式C6H12O6，分子量为180.16，是自然界分布广、重要的一种单糖，属于多羟基醛。用酶学方法测定葡萄糖是生化检测中的常用方法，常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法，上述酶学法特点是：1、灵敏度、准确度、精密度均高；2、使用温和的反应条件；3、操作简便；4、适用于自动分析仪，测定葡萄糖亦可通过邻甲苯-胺法、苯胺法、联-苯胺法等实现。

葡萄糖检测试剂盒(Folin-Wu微板法)检测原理是葡萄糖在加热的碱性环境中铜离子还原成氧化亚铜沉淀，后者使磷钼酸还原成钼蓝，使溶液呈蓝色，颜色深浅与葡萄糖含量成正比，其吸收峰为420nm，利用酶标仪测定样品和标准品的吸光度值，通过公式可以计算出样品的葡萄糖含量，可用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织、细胞培养基等样本中的葡萄糖含量定量测定。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
1、蒸馏水、PBS、生理盐水
2、离心管、96孔板
3、水浴锅
4、酶标仪

操作步骤(仅供参考)：
1、样本处理：
①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分离出的血清或血浆不应有溶血，一般需要去除蛋白质(即为无蛋白血滤液)后再经检测。取抗凝血0.1ml，加入0.7ml蒸馏水和0.1ml蛋白酸化液，混匀，缓慢加入0.1ml蛋白沉淀液，边加边摇匀，至出现暗红色蛋白质沉淀，静置10min，3000g离心5min，取上清液即为无蛋白血滤液，4℃保存备用。
②组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或PBS(ml)=1：9的比例，加入生理盐水或PBS，冰浴条件下手动或机械匀浆，2500~3000g离心10min，取上清待用。
3细胞样本：
a.取适量的细胞(一般推荐>106以上)，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。
b.用PBS或生理盐水清洗1~2次，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。
c.加入200~300μl的PBS或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W，每次3~5s，间隔30s，重复3~5次；亦可手动匀浆，制备的匀浆液不可离心；亦可用1~2%TritonX-100冰浴30~60min，制备的裂解液不可离心。
2、制备Glu标准应用液（0.55mmol/L）：取10ulGlu标准储存液(55mmol/L)，补加蒸馏水或者无菌水990ul，充分混匀即可；根据需用量，临用前按比例配置，不宜久存。
3、Glu加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，如果样品中的Glu浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
充分混匀,置于沸水浴煮沸8min，取出，在冷水中冷却，注意不能摇动，静置10min，分别加入750μl蒸馏水。
4、Glu测定：取200μl上述溶液，加入96孔板中，以空白孔调零，用酶标仪在420nm处读取标准孔和测定孔的吸光度。

计算：葡萄糖含量(mmol/L)=(测定管吸光度/标准管吸光度)×0.55×10=(测定管吸光度/标准管吸光度)×5.5其中10为去蛋白样品的稀释倍数

注意事项：
1、待测样本如不能及时测定，应置于2~8℃保存，3天内稳定。
2、上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。
3、Glu标准应用液临用前按比例配置，不宜久存。
4、如样品吸光度值偏大，则需再次稀释后重新检测。