总蛋白检测试剂盒(双缩脲比吸光度比色法)

总蛋白检测试剂盒(双缩脲比吸光度微板法)
产品简介：
总蛋白(TotalProtein，TP)由白蛋白和球蛋白组成，对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定，一般要基于如下两个假设：1、所有蛋白质分子由纯多肽组成，含氮量的质量百分比为16%；2、体液中含有数百个蛋白质分子，每个分子对测定反应都具有非常相似的特性，目前常用的检测总蛋白的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。

总蛋白检测试剂盒(双缩脲比吸光度微板法)多用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的总蛋白含量测定，无需与标准品进行比对，双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物，呈紫色，所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比例，可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。双缩脲比吸光度比色法是按照Doumas方法所规定的双缩脲试剂、控制反应条件和校准分光光度计的情况下，根据蛋白质双缩脲复合物的比吸光度，无需检测标准品吸光度，直接计算出总蛋白质浓度，该试剂盒120T可检测约60个样本。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。



自备材料：
1、96孔板或小试管
2、水浴锅或恒温箱
3、精密酶标仪

操作步骤(仅供参考)：
1、样本处理：血清、血浆样本直接取20μl检测，对于组织样本，按组织质量(g)：生理盐水(ml)=1：9比例，加入9倍体积的生理盐水或PBS，冰浴下匀浆后，2500g离心10min，取16μl上清待检。

2、TP加样：按照下表设置系列孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测能设置平行孔。
                  
3、TP测定：混匀,25℃孵育30min，用经过校准的精密酶标仪，测定540nm波长的吸光度；读取测定孔和试剂空白孔的吸光度时，以蒸馏水调零孔调零；读取样本空白孔的吸光度时，以双缩脲调零孔调零。
计算：总蛋白(g/L)=(Ac/0.298)×(2.16/0.016)=(Ac/0.298)×51
式中：校正吸光度(Ac)=At-(Ar+As)
At=测定孔的吸光度
Ar=试剂空白孔的吸光度
As=样本空白孔的吸光度
0.298为蛋白质双缩脲复合物的比吸光系数，是按Doumas标准方法，双缩脲反应溶液中蛋白质浓度为1g/L时的吸光度。

注意事项：
1、上述计算公式是以所用酶标仪波长准确，带宽≤2nm时，总蛋白含量根据比吸光度直接计算。
2、如果没有酶标仪，也可以使用分光光度计测定，使用分光光度计测定蛋白浓度时每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少，检测比色杯准确光径很重要，可用钴盐或重铬-酸钾进行检测，其吸光度分别为0.556和0.535，如检测的吸光度与实际不符，应进行校正，校正系数F=As/Am。其计算公式为:总蛋白(g/L)=(Ac/0.298)×51×F。
3、检测中发现所有孔都呈暗紫色，可能原因是样品含有还原剂，应适当透析或稀释样品。