γ-谷氨酰基转移酶(GGT)检测试剂盒(重氮微板法)

γ-谷氨酰基转移酶(GGT)检测试剂盒(重氮微板法)
产品简介：
L-γ-谷氨酰基转移酶(GGT或γ-GT)是催化γ-谷氨酰基移换反应的酶，γ-谷氨酰基从谷胱甘肽或其他含γ-谷氨酰基物质中转移到另一肽或氨基酸分子上，GGT主要存在于肝细胞膜和微粒体上，参与谷胱甘肽的代谢，血清中主要来自肝胆系统，当肝内合成亢进或胆汁排出受阻时血清中GGT往往容易增高。



γ-谷氨酰基转移酶(GGT)检测试剂盒(重氮微板法)以萘胺盐为底物，在GGT催化下γ-谷氨酰基转移到甘肽分子上，同时释放出游离的α-萘胺，后者与重氮盐反应，产生红色化合物，其颜色深浅与GGT浓度呈正比，通过酶标仪检测530nm处吸光度，进而计算酶的活性。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
1、蒸馏水
2、离心管
3、水浴锅或恒温箱
4、96孔板、酶标仪

操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：
①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃保存，用于GGT的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存，用于GGT的检测。
③(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的GGT含量。
2、配制GGT显色工作液：取GGT显色剂1支，加蒸馏水1ml，充分溶解，即为GGT显色储存液，该GGT显色储存液为过量(4℃保存,30天有效)；临用前按GGT显色储存液：显色稀释液=1：1000的比例混合，即为GGT显色工作液，4℃保存，24h有效。
3、配制系列萘胺标准：取适量的萘胺标准(1.5mmol/L)，按萘胺标准(1.5mmol/L)：GGTAssayBuffer=1：9的比例混合，即为萘胺标准工作液-萘胺标准(0.15mmol/L)。
4、GGT酶促反应：取96孔板，按照下表设置对照孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品的酶活性过高，可减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
5、GGT检测：混匀，室温放置10min，以“0”号标准孔调零，样品测定以“对照孔”调零，酶标仪测定530nm处标准孔、测定孔的吸光度。

计算：以标准孔活力单位(U/L)为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，在标准曲线上查出待测样品的GGT酶活力单位。

注意事项：
1、血清或EDTA抗凝血检测效果较，肝素钠、柠檬酸、草酸、氟化物等抗凝血会引起浑浊或者抑制酶活性(10～15%)。
2、尽量避免使用溶血样品。
3、GGT活力20~100(U/L)颜色由淡紫红色到紫红色梯度变化。
4、本产品仅用于科研领域，不能用于临床诊断或其他用途。