酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)

酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)
产品简介：
酸性磷酸酶(acidphosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。酸性磷酸酶是一个蛋白家族，哺乳动物中其分子量从18kD到100kD不等，该酶分为两类，一类为酒石酸盐敏感型，一类为氟离子敏感型。溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型，而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。

酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)(AcidPhosphataseColorimetricAssayKit)检测原理是酸性磷酸酶(ACP)水解磷酸苯二钠，产生酚和无机磷，经碱处理后酚能与4-AAP反应，产物经氧化生成红色醌类化合物，红色越多说明酸性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法测定510nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。该试剂盒主要用于检测血清中前列腺酸性磷酸酶活性，亦可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
1、蒸馏水
2、离心管或试管
3、恒温箱或水浴锅
4、96孔板
5、酶标仪

操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：
①血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存，用于酸性磷酸酶的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要可用PBS或生理盐水进行适当匀浆，一般细胞数量在106以上，组织应在100mg以上，3000~4000g离心取上清，-20℃冻存，用于酸性磷酸酶的检测。
③植物样品：取适量的植物组织加入少量生理盐水或PBS，充分捣碎或研磨，静置30min，用纱布或滤纸过滤，4000g离心20min，留取上清液并测量体积，-20℃冻存，用于酸性磷酸酶的检测。
④高活性样品：如果样品中含有较高活性的酸性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，也可以采用ACPAssaybuffer稀释。
2、稀释标准品：取适量的Phenol(10mM)和蒸馏水，按下表稀释成0、0.1mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM、0.5mM。
3、ACP加样：按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酸性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测能设置2平行孔，求平均值。
4、ACP测定：轻轻混匀，室温放置10min，空白孔调零，酶标仪测定510nm处标准孔、
测定孔的吸光度(记为A标准、A测定)，一般15min内检测完毕。



计算：
ACP活性单位的定义：在该实验条件下，每分钟每ml酶液产生1nmol酚(nmol/ml·min)为一个活性单位。求平均值，以各标准孔吸光度为纵坐标，相应的酚含量即ACP活性(U/L)为横坐标，绘制ACP活性单位吸光度值曲线，即为标准曲线。根据测得的各待测样品的吸光度，于标准曲线上查出相应的ACP活性单位，乘以稀释倍数后，换算为”nmol/ml·min”的活性单位。
组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×

注意事项：
1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、建议每次测定时都做标准曲线，以使标准更准确，另外标准品需避免反复冻融。
3、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应注意比色杯的小检测体积。
4、所测样品的值高于标准曲线的上限，应用ACPAssaybuffer稀释样品后重新测定。
5、待测样品中酸性磷酸酶活性较低时，可适当延长孵育时间至30min。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。