海藻糖酶(THL)测试盒_微量法

海藻糖酶(THL)测试盒_微量法
测定方法：微量法
产品规格：100管/48样
储存条件：低温保存

注　意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定


测定意义：
THL（EC 3.2.1.28）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。海藻糖酶主要功能在于生物体分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供应。


测定原理：
THL 催化海藻糖产生葡萄糖，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在 505 nm 有特征吸收峰，以此反映 THL 活性。


需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。


试剂的组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 6mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 10ml×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 10ml×1 瓶，4℃保存；（若出现结冰现象，可 37℃水浴溶解后使用）





测定步骤：

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 505nm，蒸馏水调零。

2、 调节水浴锅至 95 度。

3、 工作液的配制：使用前将试剂二和试剂三 1:1 等体积混合，用多少配多少。

4、加样表：

试剂名称（μL）	对照管	测定管
样本	30	30
蒸馏水	50
试剂一		50

45℃水浴，准确反应 15min，95℃水浴 5 分钟终止反应，得混合液(若出现沉淀可 10000g 4℃离心 10min 后取上清)。

混合液	20	20
工作液	180	180

混匀，置 37℃（哺乳动物）或 25'C（其它物种）保温 15min 后，于 505nm 波长处读取吸光度。
计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。