ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒_微量法

ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒_微量法

测定方法：微量法
产品规格：100管/96样
储存条件：低温保存

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：                           
ACL（EC4.1.3.8）是脂肪酸合成中的关键酶，其催化产生的乙酰辅酶A可用于脂肪酸合成和碳链延长、黄酮类物质合成、氨基酸合成等。

测定原理：
ACL在ATP和辅酶A存在的情况下催化柠檬酸裂解为乙酰辅酶A、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸盐。苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+，在340nm测定NADH减少速率，计算ACL活性。

需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

试剂组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；
试剂三：液体2μL×1支，4℃保存；




    测定步骤：

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 
2. 样本测定

（1）工作液的配置，将试剂二和试剂三转移至试剂一中，充分混合溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；（注意：可取少量试剂一至试剂二和试剂三中，充分混匀溶解后转移至试剂一瓶中，重复2-3遍）；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和190μL工作液，混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。