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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海晶抗生物工程有限公司
- 库存:
493
- 样本:
来电咨询
- 标记物:
详见说明书
- 适应物种:
来电咨询
- 应用:
仅供科研研究使用
- 检测方法:
微量法
- 检测范围:
10nmol/mL
ATP含量测试盒_微量法
测定方法:微量法
产品规格:100管/48样
储存条件:低温保存
注 意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
ATP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是生物能量通货,能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。
测定原理:
肌酸激酶催化肌酸和ATP反应生成磷酸肌酸,可在700nm下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量,以此反应ATP含量。
自备仪器和用品:
分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。
试剂组成和配制:
酸性提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
碱性提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1支,4℃保存;临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂二:液体1.5mL×1支,4℃保存;
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入500μL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:液体5mL×1瓶,4℃保存;
试剂五:液体25mL×1瓶,4℃保存;
标准液:液体10mL×1瓶,2μmol/mLATP标准液,4℃保存;
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30 min以上,调节波长到700nm,蒸馏水调零。
2、显色剂的配制:临用前请根据拟用显色剂体积(样本数×0.2 m L),按试剂四(mL):试剂五(mL)=1:5的比例配制。用多少配多少。
3、样本测定:
| 试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
| 样本 | 10 | 10 | ||
| 标准液 | 10 | 10 | ||
| 试剂一 | 20 | 20 | ||
| 试剂二 | 10 | 10 | 10 | 10 |
| 试剂三 | 10 | 10 | ||
| 蒸馏水 | 30 | 30 |
| 显色剂 | 200 | 200 | 200 | 200 |
注意:空白管和标准管通常只需要各做一个。每个测定管设一个对照管。
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分析试剂盒安全、快速、稳定,可用于筛选蛋白激酶C抑制剂或激活剂、定性定量分析纯化或部分纯化的PKC激酶活性。 测试盒原理: 基于ELISA的基本原理。PKC底物被包被在酶标板上,在ATP存在的前提下,PKC激酶将底物磷酸化,洗掉游离的PKC激酶和其他成分。再加入特异性磷酸化抗体(只识别磷酸化底物,而与非磷酸化底物无交叉反应。)检测残留在酶标板上的磷酸化底物。通过酶标二抗放大信号,读出OD值(蛋白激酶活性与OD值的对数成正比)。与对照组相比,得出处理组的蛋白激酶活性
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