ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒_可见分光光度法

ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒_可见分光光度法
测定方法：可见分光光度法
产品规格：25管/24样    
储存条件：低温保存
注    意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。

测定原理：
AGP催化的逆向反应生成G1P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。

需自备的的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水

试剂的组成和配制：
提取液：液体25mL×1瓶，4℃保存;
试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入9mL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入5mL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；





测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、试剂一置30℃保温10min以上。
3、在EP管中按顺序加入下列试剂

试剂名称（μL）	测定管
试剂一	200
试剂二	320
样本	40

混匀，30℃保温15 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴迅速冷却后，4000g4℃离心5min，取上清液，在1mL石英比色皿中依次加入下列试剂

上清液	400
试剂一	425
试剂三	175

混匀后，立即于340 nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。