磷酸烯醇式羧化酶(PEPC)测试盒_可见分光光度法

磷酸烯醇式羧化酶(PEPC)测试盒_可见分光光度法
测定方法：可见分光光度法
产品规格：50管/48样    
储存条件：低温保存
测定意义：
PEPC（EC 4.1.1.31）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是催化磷酸烯醇式二氧化碳反应生成草酰乙酸呈不可逆反应的酶，对三羧酸循环的运转起重要调节作用。

测定原理：
PEPC催化磷酸烯醇CO2生成草酰乙酸和HPO42-，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+，在340nm测定NADH减少速率，计算PEPC活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体30 mL×1瓶， 4℃保存； 
试剂二：液体10 mL×1瓶， 4℃保存；
试剂三：粉剂×2支，-20℃保存，临用前加入4mL蒸馏水充分溶解待用；现配现用。
试剂四：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入5mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五 ：原液20μL×1支，4℃保存；
试剂五：稀释液10mL×1瓶，4℃保存；





测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、试剂五工作液的配制：将试剂五原液：试剂五稀释液=1μL:329μL稀释，用多少配多少。
3、将试剂一、二、三、四和试剂五工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟。
4、加样表：

试剂名称(μL)	测定管
试剂一	500
试剂二	150
试剂三	150
试剂四	95
试剂五工作液	95
样本	20

将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中，立即混匀，加样本的同时开始计时，340 nm波长下记录初始吸光度A1和反应5分钟后的吸光度A2。计算ΔA=A1-A2。
注意事项：如果一次性测定样本数较多，可将试剂一、二、三、四、和试剂五工作液按比例配成混合液。