【Boxbio】丙二醛含量检测试剂盒
生物体内脂质过氧化反应的终产物为丙二醛(MDA),丙二醛会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合,且具有细胞毒性,其含量是反映机体抗氧化潜在能力的重要参数,可以反映机体脂质过氧化速率和强度,也能间接反映组织过氧化损伤程度。
丙二醛在酸性和高温条件下,能够与 Thiobarbituric Acid,TBA 反应生成棕红色三甲川(3,5,5-三甲基恶唑-2,4-二酮),最大吸收波长为532 nm,在此波长下进行比色可估测样品中过氧化脂质的含量。但是测定动植物组织中丙二醛含量时受多种物质的干扰,其中最主要的是可溶性糖,可溶性糖能够与TBA显色反应,最大吸收波长为450 nm,但532 nm处也有吸收,所以同时测定600 nm、532 nm、450 nm下的吸光值,通过532 nm、450 nm和600 nm处吸光值的差值即可定量检测丙二醛的含量。
注意:MDA检测工作液较难溶解,可以70℃加热并剧烈振荡或超声以促进溶解。
测定过程中所需要的仪器和试剂:可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴和蒸馏水。
1.样品处理(可根据预实验结果适当调整样本量及比例)
①细菌或细胞:离心收集细菌或细胞至离心管内,按照细菌或细胞数量(10⁴个):提取液体积(mL)为(500-1000):1的比例(建议500万细菌或细胞加入1 mL提取液)处理样品,冰浴超声破碎(功率20%,超声3 s,间隔10 s,重复30次),4℃ 8000 g离心10 min,取上清置于冰上待测。
②组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:(5-10)的比例(建议称取0.1 g组织,加入1 mL提取液)处理样品,冰浴匀浆,4℃ 8000 g离心10 min,取上清置于冰上待测。
③血清(浆)、培养液等液体样本:直接检测或适当稀释后再进行检测。
注意事项
①若检测样本吸光值过低,可适当调整沸水浴时间(60 min调整为90 min或者更长),但同一实验中的MDA检测均需延长至同一时间以免引起误差;
②植物样本中受蔗糖干扰较大,动物中受葡萄糖干扰较大,本试剂盒有针对蔗糖和葡萄糖的两个公式,若所测样品为油脂类物质,则两个公式均可;
③为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准),确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定,过程中问题请您及时与工作人员联系。
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.