CM弱阳离子交换层析填料6FF（CM Agarose 6FF

产品信息
   
产品描述
 
离子交换树脂主要包括强酸性阳离子交换树脂、弱酸性阳离子交换树脂、强碱性阴离子交换树脂和弱碱性阴离子交换树脂4种，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。
本品SP强阴离子交换树脂以高度交联的6%琼脂糖为介质，可耐受较高的流速及更高的化学稳定性，适合实验室及工业大规模纯化。本品离子交换基团-O-CH₂COO^–。
 


产品性质
   
运输和保存方法
 
冰袋运输。4-30℃保存，有效期5年。
 
使用方法
 
1 缓冲液的准备
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。
2 样品准备
样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3 装柱（使用储液器装填）
1）用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2 cm的去离子水。
2）将树脂悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
3）如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。
4）打开层析柱底部出口，开起泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速， 这样可避免液压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用你所使用泵的最大流速， 这样也可以得到一个很好的装填效果（【注】在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%）。当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
5）关闭泵，关闭层析柱出口。
6）如果使用储液器，去除储液器，将分配器至于层析柱中。
7）将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。
8）将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
4 样品纯化
1）将介质装入合适的层析柱，层析用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
2）将样品加到平衡好的CM Agarose 6FF中（保证目的蛋白与填料充分接触，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
3）用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
4）使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
5）依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。
5  SDS-PAGE 检测
将得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用SDS-PAGE 检测纯化效果。
6 填料清洗
离子交换树脂每次使用后可以用1M NaCl 甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱体积的Buffer 进行平衡至离子强度或pH值稳定。
CIP（Cleaning In Place）清洗
离子交换树脂可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。
1）去除一些沉淀或变性物质
用2倍柱体积的1M NaOH 溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100 清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
3）去除一些离子键结合物质
用3-4倍柱体积的2M NaCl清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。
 
注意事项
 
1）请勿冷冻保存本产品。
2）填料使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
3）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
 
附表 问题及解决方案
  HB220629