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- T4 多核苷酸激酶，3'-无磷酸酶 10709557001
- 2026年01月03日
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一般描述
T4 多核苷酸激酶催化 ATP 末端磷酸基团转移到 5′-DNA 或 RNA 的羟基末端。还能催化 5′ 的交换-末端磷酸基。与野生型大肠杆菌酶相比，这种噬菌体衍生物缺乏 3′-磷酸酶活性。检测时间为 30 min，体积活度为 10000 单位/毫升。应用
用 T4 多核苷酸激酶，3′-无磷酸酶，至：- 磷酸化 5′RNA 或 DNA 末端
- 磷酸化 3′RNA 末端防止环化
- 在 3′-CMP 中加入 5′ [32P]-末端标记，形成 5′ [32P] pCp。该底物常用于 t4rna 连接酶对 RNA 的 3′ 端标记。
- 标签 5′-DNA 的羟基末端与 [?-32P]-ATP（通过直接磷酸化或磷酸盐交换）
- 磷酸化 5′-从自动合成仪获得的寡核苷酸的羟基末端
- 磷酸化 5′-连接物的羟基末端。
- 在 大肠杆菌中纯化重组 RNA 。
注： 3′-在与突变型 T4 多核苷酸激酶最佳孵育条件下，未观察到野生型激酶的磷酸酶活性。
生化/生理作用
T4 多核苷酸激酶催化 ATP 末端磷酸基团转移到 5′-DNA 或 RNA 的羟基末端。还能催化 5′ 的交换-末端磷酸基。与野生型大肠杆菌酶相比，这种噬菌体衍生物缺乏 3′-磷酸酶活性。检测时间为 30 min，体积活度为 10000单位/毫升。包装
1 个试剂盒包含 2 种组分。质量
3′ 缺失--磷酸酶，核酸内切酶，切口活性，3′-核酸外切酶和核糖核酸酶，按照现行质量控制程序进行检测；使用 DNA 检测功能 5'-结束标记试剂盒。单位定义
一个单位是在 + 37℃ 下 30 min 内催化 1 nmol 32 P 掺入酸可沉淀产物的酶活性。体积活度：10 x 10 3 U/ml
其他说明
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文献和实验合成的寡核苷酸在合成时其5'端缺少一个磷酸基， 因而极易用T4 噬菌体多核苷酸化反应，这种探针可达到于 γ＝ 32 P从[ γ＝ 32 P]ATP本身同样高的放射比活度。下面所述的反应是为对10pmol寡核苷酸进行高比活度的标记而设计的。通过扩大或缩小这一反应的规模便可成功地标记不同量的寡核苷酸，而各成分的浓度则可保持不变。 1） 配制下列反应混合液： 寡核苷酸（10pmol/ μl） 1.0 μl 10xT 4 噬菌体多核苷酸酶缓冲液 2.0 μl [ γ＝
7 DNA 聚合酶以及末端转移酶。为满足工作需要，还开发有 Klenow DNA 聚合酶，耐热 DNA 聚合酶以及反转录酶。除限制修饰酶和聚合酶以外，基因操作中还用到很多重要的酶，包括：连接酶、T4 多核苷酸激酶、碱性磷酸酶、核酸酶、琼脂糖酶、蛋白酶、溶菌酶以及一些 DNA 结合蛋白。限制性核酸内切:能在特异位点（酶切位点）上催化双链DNA分子的断裂,产生相应的限制性DNA片段。 存在于细菌体内。 切割不同来源的DNA分子将产生特征性限制性酶切图谱，具有重大应用价值（“分子手术
【分享】引物延伸分析（primer extension analysis）
，用反转录酶合成cDNA。除RNA模板和标记的引物，还需要反转录酶，AMV或MMLV反转录酶、反应溶液、脱氧核苷酸、聚丙烯酰胺凝胶试剂，和电泳装置。所得结果用放射自显影和磷成像仪分析。 （2）引物延伸系统的组分：引物延伸系统中AMV反转录酶和反应溶液、焦磷酸钠、正对照RNA模版和对照引物、去磷酸的PhiX174Hinf I DNA 标准分子参照物、T4多核苷酸激酶和溶液、样品溶液、AMV反转录酶2X溶液100 mM Tris-HCl（pH8.3, 42℃）、100 mM KCl、 20 mM
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