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江苏天净沙
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250mL
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文献和实验ml) 25mM HEPES 375μl HEPES 5mM KCl 75μl 1M KCl 0.5mM MgCl2 7.5μl 1M MgCl2 DDH2O 14.54 ml 核提取缓冲液II(15ml) 25mM HEPES 375μl HEPES 5mM KCl 75μl 1M KCl 0.5mM MgCl2 7.5μl 1M MgCl2 1% NP-40 150μl NP-40 DDH2O 14.39 ml 核提取缓冲液III(15
1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor(sigma cat no P8340) and 10μl phosphatase inhibitorRIPA buffer 最终浓度1M Tris-HCl pH7.5) 5 ml 50mMNaCl 0.87g 0.15 MNa-deoxycholale 0.1g (1%)0.5M EDTA(pH8.0) 0.8mlNaF 41 mgNonidet P40 1 ml (1%)Aprotinin
] 。在上述基础上,我们进一步优化了分离方法,并将其用于本实验室大规模的叶绿体分离和蛋白质组分析工作中 [16] 。这种方法没有进行过叶绿体蛋白质输入活性的测试,但是本方法具有产率高,污染低的优点,尤其适合于叶绿体的蛋白质组分析。关于用于体外蛋白质输入活性试验的叶绿体分离方法,可以参考其他的一些报道 [17] 。2. 材料 ( 1 ) 介质 A ( 匀浆缓冲液,见注释 1):50 mmol/L HEPES-KOH ( pH 8.0) 、330 mmol/L 山梨醇、2 mmol/L EDTA
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