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一般描述
我们致力于为您提供更环保的替代产品,以符合“绿色化学的12项原则”的一项或多项原则要求。该产品为一种安全的化学品。 DIG系统是灵敏且具有成本效益的方案,可替代核酸放射性标记和检测。有许多已发表论文证明了DIG系统的通用性,因此,使用放射性标记不再是标记用于杂交的DNA的唯一选择。DIG Northern 起始试剂盒适用于DIG系统新手用户。它包含已经证实可为RNA印迹技术提供成功、可重现性结果的试剂。此外,此产品还包含标准DIG系统产品的更方便形式(例如,即用型CDP Star)。小反应体积使得用户可先使用DIG系统打下坚实的基础,然后再升级到标准包装规格。为获得最佳的效果,请将此试剂盒与DIG洗涤和封闭缓冲液套件一起使用。该试剂盒用于生成单链、DIG标记RNA探针及化学发光检测。标记探针经体外转录法合成。
应用
DIG Northern Starter Kit已用于杂交分析乙型肝炎病毒(HBV) RNA、2型柑橘麻风病毒(CiLV-C2)RNA。DIG Northern Starter Kit可制备与随附的化学发光检测试剂联用进行RNA印迹检测的DIG标记RNA探针。以线性化DNA为模板,利用SP6、T3或T7 RNA聚合酶将DIG-11-UTP整合到RNA转录物中。标记后,DIG-标记的探针即可用于杂交。为了方便起见,DIG Easy Hyb可用于杂交。直接向瓶中加入64 ml的DEPC处理(无RNase)水,即可轻松复溶DIG Easy Hyb(复溶的DIG Easy Hyb可在室温下稳定储存1个月)。杂交完成后,杂交液中包含DIG-标记的RNA探针,可保存于-15到-25°C,以备后续使用(最多可保存1年)。
包装
1个试剂盒含11种组份。1个试剂盒至多可进行10次标记反应和10次印迹检测,印迹膜大小为10×10cm2,μg DNA反应物,各获得约20μg标记RNA
灵敏度和特异性:采用1μg线性DNA模板,标记反应一般会在1小时内得到20μg新合成的DIG标记RNA。DIG-标记的RNA探针可以在斑点印迹中检测到0.1pg的同源DNA或RNA。可在0.1μg总RNA中检测到稀少的mRNA。
制备说明
工作溶液:注:使用无菌、无RNAase的溶液和仪器分析时间:9小时30分钟
样本材料:
- 线性质粒,含适当的RNA聚合酶启动子序列(SP6,T3,T7)。
- 专为PCR产物制备
工作溶液:注:使用无菌、无RNAase的溶液和仪器。
注:待转录区域的长度应在200到1000bp之间。为避免RNase污染,DNA必须酚化处理。
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。仅试剂盒组分
产品编号说明
- Labeling Mix 5x concentrated
- Transcription Buffer 5x concentrated
- SP6 RNA Polymerase 20 U/μl
- T7 RNA Polymerase 20 U/μl
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文献和实验。 植物总RNA中28S rRNA及18S rRNA在变性胶上的迁移率相当于分子量5.1kb及2.0kb RNA的迁移率,以此可作为分子量的参考。 三、为制备RNA探针模板的DNA片断亚克隆 A. 载体选择 为了获得能够在体外转录RNA探针的DNA模板,其克隆载体必须带有可供选择的特异转录启动子,同时,为了获得理想的Northern杂交试验结果,载体选择带有两种不同类型而方向相反启动子的载体,以便在RNA探针制备时同时得到两条链的转录探针。 常用
如果您需要制备RNA探针的话,推荐您使用Northern Starter Kit。该试剂盒以线性的DNA为模板,通过SP6, T7或是T3 RNA聚合酶的作用将DIG-11-UTP掺入到转录的RNA中,借助化学发光底物CDP-Star检测。另一个产品DIG RNA Labeling Kit也可用于RNA探针的标记。 末端标记寡核苷酸Oligonucleotide
我收集的几个Northern杂交protocol(同位素,DIG,生物素等),供大家参考!
我也是从网上收集过来的,仅供相关人员参考! DIG标记的Northern杂交试验指导 一、 RNA提取 方法一、改良异硫氰酸胍提取法 试剂及其配制 异硫氰酸胍变性液: 贮存液-在含484ml 水(经DEPC处理), 17.6ml 0.75mol/L柠檬酸钠(pH7.0)和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入250g异硫氰酸胍,加热至60~65℃并持续搅拌使之充分溶解。贮存液室温保存备用(不超过3个月)。 工作液-在每50ml贮存液中加入0.35ml2-ME即配
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