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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
50
- 英文名:
Hoechst 33258 stain Solution(1mg/ml)
- 保质期:
1 年。
- 供应商:
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
1mL /1mL×5
| 规格: | 1mL | 产品价格: | ¥228.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 1mL×5 | 产品价格: | ¥618.0 |
产品简介:
Hoechst 33258 为非嵌入性荧光染料。它们在活细胞中 DNA 聚 AT 序列富集区域的小沟处与 DNA 结合。
活细胞或固定细胞均可从低浓度溶液中 摄取该染料。从而使细胞核着色。故又把此类染料称为 DNA 探针。
Hoechst 33258 可溶于水并在水溶液中保持稳定。Hoechst-DNA 的激发和发射波长分别 350nm 和 460nm。
在荧光显微镜紫外光激发时,Hoechst-DNA 发出亮蓝色荧光。
使用方法:(用 PBS 稀释至 1×后使用或按照 1:100 的比例加入到细胞悬浮液中)
1. 对于固定的细胞或组织
1) 固定后细胞或组织样品,适当洗涤去除固定剂。如果需要进行免疫荧光染色,则先进行免疫荧光染色,染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33258 染色。
2) 贴壁细胞或组织切片,加入少量 Hoechst 33258 染色液,覆盖样品即可。悬浮细胞,至少加入 3 倍于待染色样品体积的染色液,混匀。室温放置 3-5 分钟。
3) 吸除 Hoechst 33258 染色液,用 TBST、PBS 或生理盐水洗涤 2-3 次,每次 3-5 分钟。
4) 直接或封片后在荧光显微镜下观察。会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染。
2. 对于活细胞或组织:
1) 加入适量 Hoechst 33258 染色液,必须覆盖待染色的样品。通常六孔板单孔需加 1ml 染色液,96 孔板单孔需加 100μl 染色液。
2) 在适宜温度下培养细胞 20~30 分钟。
3) 弃染色液,用 PBS 或合适的缓冲液洗细胞两次。
4) 直接或封片后在荧光显微镜下观察。
注意事项:
1. 荧光染料易淬灭,建议染色后尽量当天完成检测。活细胞或组织染色后宜立即观察。
2. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液(SL1840)。
3. Hoechst 33258 对人体有害,请注意适当防护。请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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文献和实验Hoechst 33258染色液,染色5分钟。也宜用摇床,或手动晃动数次。 5. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟。 6. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,尽量避免气泡。使细胞接触封片液,切勿弄反。 7. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。 二、悬浮细胞 1. 离心收集细胞样品于1.5 ml离心管内,加入0.5 ml固定液,缓缓悬起细胞,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。 2. 离心去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次
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%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过夜,使约为50%-80%满。B. 刺激细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入0.5ml固定液,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。C. 去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次。D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分钟。也宜用摇床,或手动晃动数次。E. 用PBS
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