- ￥1114 - 4624
- 博尔森/BIOESN
- BES22054KB
- 中国
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
SP Sepharose FF
- 保质期：
3 年
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100mL /500mL
| 规格： | 100mL | 产品价格： | ￥1114.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 500mL | 产品价格： | ￥4624.0 |
于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
1. 外观
本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无杂质。
2. 理化指标
*检测条件： 层析柱 10mm×300mm *柱床高 15cm，25℃，流动相为 0.1mol/LNaCl。
3. 包装
产品以试剂瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小、生产单位” 等内容。
4. 运输
运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。
5. 贮存
产品应密封贮存在 4℃~25℃（保存溶液为 20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。 用过的柱子贮存在 4℃（20% 乙醇加 0.2mol/L NaAC）。
6. 注意事项
本产品避免与氧化剂接触；避免在 pH 值 < 4 时长时间暴露(一周，20℃)。
7. 保质期：
3 年。
8. 应用
本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非 特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在 pH 工作范围内可形成正离子的生物大分子的 分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
下面简要介绍介质的使用过程。
8.1 装柱
（1）让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。
（2）根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉 20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1
的比例）配成匀浆。
（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶
在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过，使柱床稳定。用 2~3 倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
8.2 平衡
让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡液是低浓度的缓冲溶液，如NaAC 、PBS 等。
8.3 上样
（1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。盐浓度太大的样品处理后再配。
（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。
（3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和 pH 值。盐浓度小，
介质对样品组分吸附较牢。用 SP 琼脂糖介质时，推荐的 pH 值是小于目标产品等电点 1 个单位。
8.4 洗脱
SP 琼脂糖介质可用增大盐浓度或增大 pH 值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。
8.5 再生
一般用高盐浓度的缓冲液（含 1~2mol/L NaCl）洗或增大 pH 洗 10 倍以上柱体积，接着用结合蛋白的
平衡液洗到平衡，可再次使用。
若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
8.6 在位清洗
（1）对于以离子键结合上去的蛋白，可以用 2M Nacl 去除。
（2）对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用 1M NaOH 去除。
（3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用 4~10 倍柱体积的 70%乙醇或 30%异丙醇清洗，但要注意
有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。
清洗完毕后，用至少 3 倍缓冲液平衡柱子。
8.7 注意
在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。
8.8 去热源
用 0.5M 的清洗柱子 5~6 小时或用 0.1M 的 24 小时。或用以下方法步骤去除：
（1）2 倍柱体积的 70%乙醇；
（2）2 倍柱体积 50mM Tris-Hcl pH7.5；
（3）1 倍柱体积 4M 尿素；
（4）3 倍柱体积的 Tris 缓冲液+0.1M Nacl；
以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。
8.9 消毒
用 0.5~1M NaOH 室温下洗 8~10 倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验【原创】Protein A Sepharose 之进化篇。。。
[img][/img]Protein A 柱之进化 Protein A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区结合。因而，将Protein A 与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可制备用于抗体纯化的亲和填料。 早期的Protein A柱结合的都是天然Protein A。天然Protein A由5个IgG结合域和其它未知功能的非Fc结合域组成，分子量约42KD，结构如图1所示。这种柱子对IgG的亲和能力很强，可以吸附大量的lgG。但同时，天然
有严格的规定，所以去除核酸非常重要。核酸带有阴性的电荷，可用阴离子交换色谱填料DEAE 琼脂糖凝胶FF 或Q 琼脂糖凝胶FF 去除，也可用阳离子色谱填料： SP 琼脂糖凝胶FF 或CM 琼脂糖凝胶FF 直接把目标蛋白吸附而去除核酸。在2M 硫酸铵的条件下，RNA 和DNA 都可以被苯基琼脂糖凝胶FF 吸附。此外也可以用核酸酶处理样品，把核酸降解成小片段，用凝胶过滤就可以去除。此外也可以本公司的DNA 纯化琼脂糖凝胶FF 去除。3.纯化硫酸铵沉淀样品硫酸铵沉淀是很常用的初分离的手段，这样沉淀后的样品
核酸 大量的核酸会使样品的粘度增加，影响传质从而影响分离效果，此外在药品检验中也对核酸的含量有严格的规定，所以去除核酸非常重要。 核酸带有阴性的电荷，可用阴离子交换色谱填料DEAE琼脂糖凝胶FF或Q琼脂糖凝胶FF去除，也可用阳离子色谱填料：SP琼脂糖凝胶FF或CM琼脂糖凝胶FF直接把目标蛋白吸附而去除核酸。在2M硫酸铵的条件下，RNA和DNA都可以被苯基琼脂糖凝胶FF吸附。 此外也可以用核酸酶处理样品，把核酸降解成小片段，用凝胶过滤就可以去除。此外也可以本公司的DNA纯化琼脂糖凝胶FF去除
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