- ￥188 - 358
- 博尔森/BIOESN
- BES21642KB
- 中国
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
Stripping Buffer(with β-ME)
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
室温
- 规格：
100mL /500mL
| 规格： | 100mL | 产品价格： | ￥188.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 500mL | 产品价格： | ￥358.0 |
膜再生液/抗体清除液（含β-ME）
保存条件：室温保存，一年有效。
产品内容：
产品简介：
膜再生液亦即 Western 一抗、二抗去除液（Stripping buffer），用于 Western 中转移了蛋白的膜的重复利用。在 Western 中完成了一抗、二抗结合和后续的化学发光检测后，有时还需要检测 tubulin、actin 等表达量相对稳定的蛋白作为参照，或检测其它蛋白进行比较。通过使用膜再生液，充分去除一抗、二抗，可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一个 SDS-PAGE 胶相比，不仅省时省力，而且可以消除重新上样所形成的误差，使可比性更强。
使用膜再生液多次重复使用同一张膜，会导致蛋白信号的减弱。但是，本品经过多个抗体的检测试验，通常可以重复利用膜 3-5 次。使用本试剂只需大约 30-40 分钟即可实现蛋白膜的重复使用，然后可以进行封闭等后续的 Western 操作。
使用说明：
1. 在完成 Western 化学发光检测后，蒸馏水中漂洗 5 分钟。
2. 弃蒸馏水，加入适量的膜再生液（含β-ME），至少需把膜完全覆盖。置 50℃水浴箱中 30min，间断振摇。
3. 弃膜再生液（含β-ME），并吸尽残余液体。加入 TBS、TBST 或 PBS 漂洗 3-4 次，每次在摇床上漂洗3-5 分钟。
4．进行封闭(blocking)等 Western 的后续操作。
注意事项：
1．使用辣根过氧化物酶(HRP)，任何一次封闭(blocking)都应当使用 5%脱脂牛奶，如果使用碱性磷酸酯酶，何一次封闭都应当使用酪蛋白(casein)。
2．膜再生液（含β-ME）仅适用于 PVDF 膜。用于硝酸纤维素膜时会导致转移到膜上的蛋白有非常显著的损失。
3．使用 ECL、BeyoECL 等类似的化学发光试剂进行的 Western 检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的 Western 检测，例如 DAB，NBT/BCIP，不适用于本试剂。
4．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验的，但是这结果是不是假阳性呢？还得做个阴性对照。阴性对照如何设置呢？考虑到整个实验体系会出现 beads、抗X抗体、诱饵蛋白 X、靶蛋白 Y（co-IP）： 可能出现的假阳性来源 需要的阴性对照 抗 X 抗体结合非特异的蛋白 与 IP 一抗种属亚型相同的免疫球蛋白（比如，抗 X 抗体是 Mouse IgG，阴性对照可使用 Mouse 免疫球蛋白） beads 对蛋白的非特异结合* 同上，此外还可进行 Pre clear，IP 正式实验前排除非特异结合蛋白。如果使用琼脂
-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次（对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤）。 加入预冷的 RIPA 液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注：悬浮细胞，收集
到 5 ml 的 1X PBS 中。4 °C 缓慢搅拌 2 小时。离心沉淀微球，用 PBS 清洗两次。将微球重悬在 1 倍体积的 PBS 中。（处理后的微球可以在 4 °C 存放 2 周）4. 3X SDS 上样缓冲液：187.5 mM Tris-HCl (pH 6.8 25 °C), 6% w/v SDS, 30% 甘油, 150 mM DTT, 0.03% w/v 溴酚蓝。细胞裂解样品制备1. 吸去培养基。加入含调控因子的新鲜培养基，处理所需的时间。2. 在非变性条件下收集细胞，弃去培养
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