- ￥338 - 1658
- 博尔森/BIOESN
- BES20077KB
- 中国
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
Super Yeast Transformation Kit
- 保质期：
24个月
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
20T /200T
| 规格： | 20T | 产品价格： | ￥338.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 200T | 产品价格： | ￥1658.0 |
Super酵母感受态制备与转化试剂盒
储存条件：-20 ℃保存，未开封有效期 24 个月。Y3 避免多次冻融；Y1、Y2 溶液可 2-8 ℃保存。
产品内容：
产品说明：
Super 酵母感受态制备与转化试剂盒（可以完成酿酒酵母感受态制备，感受态冻存，转化实验。最突出的优点可一次性制备 200 支感受态，-80 ℃冰箱可冻存一年，后续酵母转化实验无需重新制备感受态，操作简单快速，该试剂盒的转化效率与经典酵母转化试剂盒基本相同。如需进一步提高酵母转化效率，可选用 的 Super 酵母感受态制备与转化试剂盒 Plus或单独购买 YPD Plus Liquid Medium，转化产物用 YPD Plus 复苏，其转化效率可以提高 50-100%。
使用方法：
感受态细胞的制备：（按小体积转化制备 20 支感受态计，可按比例扩大）
1. 活化菌种。-80 ℃保存的菌种在 YPDA 培养基平板上划线，30 ℃培养 2-4 天。
2. 挑取酵母单菌落在 YPDA 培养基平板上划 3-5 mm 的短线，30 ℃培养 2-4 天。
3. 待酵母单菌落直径长至 2 mm 时，把酵母细胞接种到 3 mL 液体 YPDA 培养基中，30 ℃过夜培养。
4. 第二天转接到含有 50 mL 液体 YPDA 培养基的三角瓶中继续培养，待 OD600达到 0.4-0.5，3000 rpm 离心 5 min，弃上清。（4 ℃保存 1 周内的酵母菌液，用 3 mL 接种 50 mL YPDA 培养基过夜培养）
5. 用 10 mL Y1 溶液重悬沉淀，3000 rpm 离心 5 min，弃上清。
6. 加入 1 mL Y2 溶液重悬，按 50 μL 分装于 1.5 mL 无菌冻存管，转文库按 600 μL 分装，感受态细胞即制备完毕，可直接用于转化。
7. 制备好的感受态细胞需缓慢冷冻后，再置于-80 ℃冰箱长期保存。将感受态细胞放入程序降温盒，或用多层纸包裹放入泡沫盒中，先置于-80 ℃冰箱过夜后，再取出感受态置于-80 ℃冰箱，可保存一年。使用前室温融化后用于转化。
转化预混液配制：
酵母质粒转化：
1. 吸取 360 μL 预混液加入 50 μL 感受态细胞中，反复吹吸沉淀，使酵母细胞完全悬浮于预混液中。
2. 30 ℃的水浴锅中热激 60 min，每 10 min 混匀一次。对于部分菌种，延长孵育时间可提高转化效率，但不要超过 3 小时。
3. 12,000 rpm 离心 15 s，弃上清。
4. （可选步骤）用 1 mL YPD Plus Liquid Medium 重悬沉淀，30 ℃摇床震荡培养 30-60 min。12000 rpm 离心 15 s，弃上清。
5. 加入 400 μL 无菌去离子水或 0.9%氯化钠溶液重悬菌体，涂筛选培养基平板，30 ℃培养 2-4 天。
酵母文库转化：（需用 15-50 mL 离心管）
1. 将 2592 μL 预混液加入到 600 μL 感受态细胞中，震荡使感受态细胞充分悬浮于预混液中。
2. 30 ℃的水浴锅中热激 90 min，每 10 min 混匀一次。对于部分菌种，延长孵育时间可提高转化效率，但不要超过 3 小时。
3. 3000 rpm 离心 5 min，弃上清。
4. （可选步骤）用 3 mL YPD Plus Liquid Medium 重悬沉淀，30 ℃摇床震荡培养 90 min，3000 rpm 离心 5min，弃上清。
5. 加入 15 mL 无菌去离子水或 0.9%氯化钠溶液重悬菌体，涂筛选培养基平板，30 ℃培养 2-4 天。
注意事项：
1. 转化全程要求无菌操作。
2. 为了保证转化效率，务必缓慢冻存感受态，感受态不宜直接用液氮冻存。
3. 增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验1、毕氏酵母氯化锂转化法（1）试剂1M LiCl（用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌；必要时用消毒去离子水稀释）50% PEG3350（Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌，用较紧的盖子的瓶子分装）2mg/ml salmon sperm DNA / TE（10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA）-20℃保存注：醋酸锂对毕氏酵母无效，仅氯化锂有效；PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用；（2）感受态毕氏酵母的制备接种Pachia pastoris
酿酒酵母感受态细胞的制备 （1）从YPD平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母EBY100单克隆至10 ml YPD液体培养基，30℃，250 rpm 培养过夜。 （2）测定过夜培养物的OD600值为3.0~5.0之间。 （3）将10 ml YPD过夜培养物稀释至OD600值为0.2~0.4。 （4）在28~30℃摇床中继续培养3~6 hr，使其OD600值达到0.6~1.0。 （5）于室温1500 g 离心5 min 收集酵母细胞，弃上清。 （6）用10 ml 洗液洗酵母
实验目的1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验原理转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。转化中的受体细胞： 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，常用 RM 符号表示。转化方法：电击
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