Bis-Tris-SDS-PAGE制胶试剂盒(低丰度)
储存条件:Acr-Bis 溶液 2-8 ℃储存,其它常温储存。有效期 1 年。
产品组成:(可制备 8%的 1.5mm 厚的 mini 胶 50 块)
产品介绍:
Bis-Tris-SDS-PAGE 凝胶电泳的成本虽高于普通的 Tris-甘氨酸-SDS-PAG 电泳体系,但是可以得到清晰笔直的条带。Bis-Tris-SDS-PAGE 凝胶同样适用于 6-400kD 的蛋白电泳;电泳体系呈酸性,抑制半胱氨酸的二次氧化,防止二硫键在凝胶中交联;缓冲体系中加入抗氧化剂,整个电泳过程都在还原条件下进行,有效防止二硫键的形成;小分子蛋白迁移速度慢,不易跑出凝胶,避免丢失小片段蛋白;利用 LDS 上样缓冲液的高 pH 值可以防止天冬氨酰-脯氨酰的裂解从而保证蛋白的完整性。
操作步骤:(以 1.5mm 厚 mini 胶为例;0.75mm 厚 mini 胶用量减半)
一、灌制分离胶
1.参照凝胶模具说明书,装配好模具。
2.取相应体积的 32% Acr-Bis、3.5×Bis-Tris 凝胶缓冲液和双蒸水(参照表 1)在小烧杯或试管中混合。
3.加入 10% APS 溶液和 TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4.注入模具(留少许以判断凝胶状态),避免产生气泡,凝胶混合液加至距前玻璃板顶端约 1.5 cm 或距梳齿 0.5 cm,轻轻加入 1 mL 水覆盖封胶,使分离胶表面保持平整。
5.静置 30-60 分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。
二、灌制浓缩胶
1.倒掉覆盖在分离胶上的水层。
2.将相应体积的 32% Acr-Bis、3.5×Bis-Tris 凝胶缓冲液和双蒸水(参照表 2)在一个小烧杯或试管中混合。
3.加入 10% APS 和 TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4.将浓缩胶溶液加至分离胶的上面(留少许以判断凝胶状态),避免产生气泡,直至前玻璃板的顶端。
5.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
6.静置 30-60 分钟,待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,避免破坏加样孔。
7.进行常规电泳操作。参照说明书 SK6013L 以及 SK6013H 进行电泳。
注意事项:
1. APS 溶液常温不稳定,取用后立即放回-20 ℃冰箱;若发现凝胶时间延长,应更换 APS 溶液。
2. PAGE 凝胶的凝聚速度与温度以及 APS、TEMED 的用量密切相关;可通过增加 APS 及 TEMED 的用量,加快 PAGE 凝胶的聚合速度,但凝胶聚合过快不利于操作。
3. 在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。
4. 在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作,加水时速度不能太快。
5. 具有神经毒性,操作时请穿戴实验服和一次性手套。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!