磷酸酶抑制剂Cocktail（100×，干粉）

献给初学者：手把手教你做免疫共沉淀实验

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 注意：在准备做磷酸（酯）酶实验的时候，不加磷酸酯酶抑制剂。 一、工作液配制 配制 100 ml 的 modified RIPA buffe： 1.称取 790 mg 的 Tris-Base，加到 75 ml 去离子水中，加入 900 mg 的 NaCl，搅拌

【求助】p85和p-ERK western检测问题

signaling公司的Phospho-PI3K p85 (Tyr458)/p55(Tyr199) 我自己分析没有条带无非是细胞状态不好，或者抗体不好，不知道还有没有可能是没有加磷酸化酶抑制剂，以至于磷酸化的蛋白被去磷酸化了？ 谢谢啦～ yhwangcams 检测内参蛋白如GAPDH,ACTIN,TUBULIN是否成功？ 用PLB裂解细胞得到的蛋白适合做REPORTER，做WESTERN不太合适。建议可以用其他BUFFER裂解蛋白。

免疫共沉淀实验指南

-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次（对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤）。 加入预冷的 RIPA 液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注：悬浮细胞，收集