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5×DNA退火缓冲液
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50
5×DNA Annealing buffer
1年
上海博尔森生物科技有限公司
-20℃
1mL /5mL
保存:-20℃保存,保质期 1 年。
产品内容:
产品说明:
5×DNA 退火缓冲液不仅可以用于常规的 DNA oligo 的退火,而且特别适合于较难退火的用于 RNAi (也称 siRNA)质粒构建的 DNA oligo 的退火。用于 RNAi 质粒构建的 DNA oligo 通常由于含有约 20 个左右的互补序列,极易自身形 成发夹结构,从而影响两条 DNA oligo 的正确退火。
5×DNA 退火缓冲液可以有效避免 DNA oligo 自身形成发夹结构,并且两条 oligo 退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。
操作说明:
1. 把待退火的 DNA oligo 用经灭菌的 Milli-Q 水或重蒸水配制成 50µM。溶解 5×DNA 退火缓冲液,混匀备用。
2. 如下设置退火反应体系:
按照上述顺序依次加入各种试剂,混匀。如果所用的 PCR 仪没有热盖,滴加矿物油(mineral oil)以防止蒸发。
3. 如下设置 PCR 仪进行退火反应:
注 1:如果所用的 PCR 仪不具备下降 0.1ºC 的功能,也可以设置为每 90 秒下降 1ºC。
4. 退火结束后可以直接用于连接反应,也可以-20ºC 冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应,最好用纯化试剂盒 进行纯化,或者确保退火产物在反应体系中体积不超过 5%,以避免 Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。
注意事项:
1.使用本试剂盒操作非常简单,只需把待退火的 DNA oligo 和 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)按照一定比例混合后,置于 PCR 仪上,约 90 分钟即可完成。
2.如果一次退火反应体积为 100 微升,一个包装的退火缓冲液可以进行 50 次退火反应。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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