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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
50
- 英文名:
5×DNA Annealing buffer
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
1mL /5mL
| 规格: | 1mL | 产品价格: | ¥188.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 5mL | 产品价格: | ¥358.0 |
5×DNA退火缓冲液
保存:-20℃保存,保质期 1 年。
产品内容:

产品说明:
5×DNA 退火缓冲液不仅可以用于常规的 DNA oligo 的退火,而且特别适合于较难退火的用于 RNAi (也称 siRNA)质粒构建的 DNA oligo 的退火。用于 RNAi 质粒构建的 DNA oligo 通常由于含有约 20 个左右的互补序列,极易自身形 成发夹结构,从而影响两条 DNA oligo 的正确退火。
5×DNA 退火缓冲液可以有效避免 DNA oligo 自身形成发夹结构,并且两条 oligo 退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。
操作说明:
1. 把待退火的 DNA oligo 用经灭菌的 Milli-Q 水或重蒸水配制成 50µM。溶解 5×DNA 退火缓冲液,混匀备用。
2. 如下设置退火反应体系:

按照上述顺序依次加入各种试剂,混匀。如果所用的 PCR 仪没有热盖,滴加矿物油(mineral oil)以防止蒸发。
3. 如下设置 PCR 仪进行退火反应:

注 1:如果所用的 PCR 仪不具备下降 0.1ºC 的功能,也可以设置为每 90 秒下降 1ºC。
4. 退火结束后可以直接用于连接反应,也可以-20ºC 冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应,最好用纯化试剂盒 进行纯化,或者确保退火产物在反应体系中体积不超过 5%,以避免 Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。
注意事项:
1.使用本试剂盒操作非常简单,只需把待退火的 DNA oligo 和 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)按照一定比例混合后,置于 PCR 仪上,约 90 分钟即可完成。
2.如果一次退火反应体积为 100 微升,一个包装的退火缓冲液可以进行 50 次退火反应。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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文献和实验一般先配制50倍的TAE缓冲液,用时再稀释成1倍的。 50倍TAE缓冲液的配制方法为 1. 称取下列试剂于1L烧杯中: Tris 242g Na2 EDTA.2H2 O 37.2g 2.向烧杯中加入约600mL的去离子水,充分搅拌溶解
碘化物缓冲液: 10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA, 4 M NaCl。室温避光贮存。不知道这里面哪个是需要避光的?我怎么没有提出DNA来,不知道是为什么?用的是NEB手册上写的方法。1. 按上述方法进行噬菌斑扩增,在第一步离心后,将500 µl含噬菌体上清转入一新鲜离心管。2. 加200 µl PEG/NaCl,颠倒混匀,室温放置10 min。3. 离心10 min,弃上清液。4. 短暂离心,小心吸去残余上清。5. 沉淀物彻底重悬于100 µl碘化物缓冲液中
一、实验概要 PCR 扩增目标 DNA 片段。 二、实验原理 多聚酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)基本原理类似于 DNA 的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR 由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。 1. 模板 DNA 的变性:模板 DNA 经加热至 93℃ 左右一定时间后,使模板 DNA 双链或经 PCR 扩增形成的双链 DNA 解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备; 2. 模板 DNA 与引物
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