DNA尿素-PAGE制胶及电泳试剂盒(8%可制胶1L)
储存条件:Acr-Bis 溶液和上样液短期 4℃保存,长期-20℃保存,有效期 2 年。
产品组成:
操作步骤:
用于 SSCP-PCR 分析的非变性 PAGE 电泳(其他应用请相应修改参数)
一、PAGE 浓度和交联度的选择指南
1.尿素-PAGE 一般推荐用 29:1(的交联度,在此条件下,DNA 片段和最适 PAGE 浓度对应关系如下:
二、胶制备尿素-PAGE 胶(参照附表)
1.参照附表的配置合适浓度的 PAGE 胶,摇晃混匀。
2.将配置好的胶倒入胶板,在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶,插入梳子。
3. 室温聚合 30-60 分钟(低温抑制聚合反应,故最好室温)。
4. 待胶凝固后拔出梳子,用 0.5×TBE 液冲洗加样孔。
三、样品处理
对一般样品、测序样品、微卫星 DNA、AFLP 样品、DDRT 样品、RPA 样品:将样品跟上样液 1:1 混合,95℃ 3 分钟变性,然后放冰上待用;对 TGGE 样品:可以直接上样。
四、电泳
1.将凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽中加入足够 0.5×TEB 电泳液。
2.预电泳 5-30 分钟后,将冰上放置的样品上样。
3. 连接电源线,打开电源开关。根据胶的大小选择功率(固定功率可以固定产热,这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压,产热都将随电泳时间而变化,不好控制)。对小胶一般用 5-6W固定功率,大胶用 15-25W 固定功率。
4. 终止电泳,取出凝胶进行后续的处理(如银染)。注意:如果银染,必须延长固定时间以便洗出尿素,否则残留尿素会干扰后面的银染。
注意事项:
1. APS 溶液不稳定,每次取用后立即放回冰箱,以防失效;若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换 10% APS。
2. PAGE 凝胶的凝聚速度与温度以及 APS、TEMED 的用量密切相关;可通过改变 APS 及 TEMED 的用量,控制 PAGE 凝胶的聚合速度,凝胶聚合过快不利于操作。
3. 在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。
4.具有神经毒性,操作时请穿戴实验服和一次性手套。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!