动物基因组DNA快速提取试剂盒
储存条件:常温保存,保质期 1 年。
产品内容:
产品介绍:
动物基因组 DNA 快速提取试剂盒不含巯基乙醇等刺激性试剂,安全无毒。主要用于提取新鲜或者冷冻的动物组织中的基因组 DNA。提取的 DNA OD260/280 一般在 1.8 -1.9 之间,纯度高,不含污染和抑制剂,可以直接用于 PCR、酶切、杂交等后续实验。
注意事项:
1.裂解液 I 和纯化液 II 容易产生沉淀,纯化液 II 比较粘稠,用前均需要放置在 65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低,用前充分摇匀。
2. 自备试剂:氯仿。
(一)样品裂解:
1. 贴壁细胞
吸尽培养液,在每 10 cm2细胞中加入 0.8 mL 预热的裂解液 I ,用枪充分吹打以确保细胞全部裂解,然后把裂解液转移到 1.5 mL 离心管中。
2. 悬浮细胞
离心收集细胞,吸尽液体,在每 1-5×10
6悬浮细胞中加入 0.8 mL 预热的裂解液 I,用枪充分吹打以确
保细胞全部裂解。然后把裂解液转移到 1.5 mL 离心管中。如果是 fibroblasts 或 carcinoma 细胞,细胞使用量不要超过 1×106 个细胞。
3. 新鲜或冷冻的组织
a. 匀浆处理: 将剪切成小块的新鲜或冷冻保存的组织放入 10 mL 或 15 mL 离心管中,每 50-100 mg 组织加 0.8 mL 预热的裂解液 I,用剪切式匀浆器匀浆 30 s 左右,然后把裂解液转移到 1.5 mL 离心管中。
b. 液氮研磨: 称取动物组织 50-100 mg ,剪成小块,液氮研磨成粉后,加入已加入 0.8 mL 裂解液 I 的1.5 mL 的离心管中。
c. 对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的 DNA),建议组织的使用量不要超过 50 mg。
(二)样品纯化:
1. 在步骤(一)所得的约 0.8 mL 的裂解产物中加入 0.4 mL 预热的纯化液 II,颠倒数次混匀。(由于纯化液 II 比较粘稠,可以将 1 mL 枪头剪去一截再吸取)。
2. 65℃水浴 5-10 min。如果室温放置,DNA 产量会降低 10-20%。
3. 加入 200 uL 自备氯仿,震荡混匀 10-30 秒。
4. 12,000 rpm 室温离心 2 分钟。此时上清液将变得透明,中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的 1.5mL 离心管中,避免触及中间层的白膜。
(三)基因组 DNA 收集:
1. 将步骤(二)所得的上清转移到 5 mL 或者 10 mL 的离心管中,加入 1.5 倍体积的结合液 III,颠倒数次混匀后,分多次上同一 DNA 吸附柱,每次上柱后均先室温放置 2 min,然后 12,000 rpm 离心 1 min,弃穿透液。(也可将上清平均转移到两个 1.5 mL 离心管中,分别加入 1.5 倍体积的结合液 III )
2. 在吸附柱中加入 500 μL 洗涤液,12,000 rpm 离心 1 min,弃穿透液;重复洗涤一次。
3. 再将吸附柱 12,000 rpm 离心 30 s 以甩干乙醇。
4. 将吸附柱放入一个干净的 1.5 mL 离心管中。在吸附柱中央加入 50 μL 洗脱液(65-70℃预热),室温静置 2 min。12,000 rpm 离心 1 min。将穿透液重新加入吸附柱中央,12,000 rpm 离心 1 min 以洗脱更多基因组 DNA。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!