真菌基因组DNA快速提取试剂盒
储存条件:RT 储存,未开封保质期 24 个月。
产品内容
产品说明:
本产品通过玻璃珠破碎或者液氮研磨菌体等物理方法,辅以强效的化学裂解液高效裂解真菌细胞壁,无需蜗牛酶等破壁酶长时间酶解细胞壁过程。单组样品提取可在 30 min 内完成。提取的 DNA 没有蛋白质以及盐离子污染,可直接用于酶切,PCR 等后续实验。
操作步骤:
(一)菌体收集
1. 菌液集菌:取 3-5 mL 过夜培养的菌液(OD600 一般在 1 以上)到离心管中,12,000 rpm 离心 2 min 弃上清留菌体沉淀(1.5 mL 离心管需离心 3-4 次收集菌体)。
2. 菌落集菌:用接种针或枪头在培养基上刮取尽可能多的菌落,转移到装有 1 mL 无菌水的离心管中,洗下接种针或枪头上的菌体。12,000 rpm 离心 2 min 弃上清留菌体沉淀。
3. 洗涤菌体:在菌体沉淀中加入无菌水 1 mL 重悬菌体, 12,000rpm 离心 2 min 弃上清留菌体沉淀。
(二)菌体裂解:
1. 玻璃珠破碎:在菌体沉淀中加入 500 μL 裂解液 I 和 0.5 g 的玻璃珠,常温涡旋震荡 10 min。
注:此步也可液氮研磨:将菌体沉淀放入研钵中,加入液氮研磨成粉后转移到新的离心管中,再加入500 μL 裂解液 I,常温涡旋震荡 3 分钟。
2. 在含裂解产物的离心管中加入 500 μL 裂解液 II,涡旋震荡 3 min,12,000 rpm 离心 2 min,将分层后的上清液全部转移到一个 5 mL 的离心管中。
注意:下层为浅黄色有机蛋白相(玻璃珠在管底),上层为澄清或者乳白色水相,水相含基因组 DNA,小心吸取,避免触及有机相。
(三)基因组 DNA 收集:
1. 在步骤(二)所得的上清中加入 3 倍体积的结合液 III,颠倒数次混匀后,分三次上 DNA 吸附柱,每次上柱后均先室温放置 2 min,然后 12,000 rpm 离心 1 min,倒掉穿透液。
2. 在吸附柱中央加入 500 μL 洗涤液,12,000 rpm 离心 1 min,弃穿透液。
3. 再将吸附柱 12,000 rpm 离心 30 s 以甩干乙醇。
4. 将吸附柱放入一个 1.5 mL 离心管中。在吸附柱中央加入 50 μL 洗脱液(65-70 ℃预热),室温静置 2 min。12,000 rpm 离心 2 min。将穿透液重新加入吸附柱中央,12,000 rpm 离心 1 min 以洗脱更多基因组 DNA。
5. 检测 DNA 质量。将所得的基因组 DNA 保存于-20 ℃冰箱。
注意事项:
1. 如需大量提取,可以增加样品处理量,具体操作可咨询本公司。
2.为了您的个人健康,请戴手套操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!