真菌基因组DNA快速提取试剂盒

真菌基因组DNA快速提取试剂盒

 

储存条件：RT 储存，未开封保质期 24 个月。

产品内容

产品说明：

本产品通过玻璃珠破碎或者液氮研磨菌体等物理方法，辅以强效的化学裂解液高效裂解真菌细胞壁，无需蜗牛酶等破壁酶长时间酶解细胞壁过程。单组样品提取可在 30 min 内完成。提取的 DNA 没有蛋白质以及盐离子污染，可直接用于酶切，PCR 等后续实验。

操作步骤：

（一）菌体收集

1. 菌液集菌：取 3-5 mL 过夜培养的菌液（OD600 一般在 1 以上）到离心管中，12,000 rpm 离心 2 min 弃上清留菌体沉淀（1.5 mL 离心管需离心 3-4 次收集菌体）。

2. 菌落集菌：用接种针或枪头在培养基上刮取尽可能多的菌落，转移到装有 1 mL 无菌水的离心管中，洗下接种针或枪头上的菌体。12,000 rpm 离心 2 min 弃上清留菌体沉淀。

3. 洗涤菌体：在菌体沉淀中加入无菌水 1 mL 重悬菌体， 12,000rpm 离心 2 min 弃上清留菌体沉淀。

（二）菌体裂解：

1. 玻璃珠破碎：在菌体沉淀中加入 500 μL 裂解液 I 和 0.5 g 的玻璃珠，常温涡旋震荡 10 min。

注：此步也可液氮研磨：将菌体沉淀放入研钵中，加入液氮研磨成粉后转移到新的离心管中，再加入500 μL 裂解液 I，常温涡旋震荡 3 分钟。

2. 在含裂解产物的离心管中加入 500 μL 裂解液 II，涡旋震荡 3 min，12,000 rpm 离心 2 min，将分层后的上清液全部转移到一个 5 mL 的离心管中。

注意：下层为浅黄色有机蛋白相（玻璃珠在管底），上层为澄清或者乳白色水相，水相含基因组 DNA，小心吸取，避免触及有机相。

（三）基因组 DNA 收集：

1. 在步骤（二）所得的上清中加入 3 倍体积的结合液 III，颠倒数次混匀后，分三次上 DNA 吸附柱，每次上柱后均先室温放置 2 min，然后 12,000 rpm 离心 1 min，倒掉穿透液。

2. 在吸附柱中央加入 500 μL 洗涤液，12,000 rpm 离心 1 min，弃穿透液。

3. 再将吸附柱 12,000 rpm 离心 30 s 以甩干乙醇。

4. 将吸附柱放入一个 1.5 mL 离心管中。在吸附柱中央加入 50 μL 洗脱液（65-70 ℃预热），室温静置 2 min。12,000 rpm 离心 2 min。将穿透液重新加入吸附柱中央，12,000 rpm 离心 1 min 以洗脱更多基因组 DNA。

5. 检测 DNA 质量。将所得的基因组 DNA 保存于-20 ℃冰箱。

注意事项：

1. 如需大量提取，可以增加样品处理量，具体操作可咨询本公司。

2.为了您的个人健康，请戴手套操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！