细菌RNA提取试剂盒
储存条件:4℃保存,保质期 1 年。
产品内容:
产品说明:
细菌 RNA 快速提取试剂盒适用于革兰氏阴性菌 RNA 提取,可以简单快速地纯化高质量的总RNA。纯化好的总 RNA 可用于 mRNA 分离,RT-PCR,Northern 杂交等下游分子实验。如提取革兰氏阳性菌 RNA 建议用真菌 RNA 快速提取试剂盒提取。
自备试剂:
氯仿
(一)菌体裂解:
1. 在 1.5 mL 塑料离心管中离心收集 1-3 mL 新鲜细菌。注意:由于细菌 RNA 半衰期十分短,所以必须使用鲜的、处于对数生长期的细菌。
2. 吸尽液体培养基,加入 0.5mL 裂解液,用枪充分吹打细菌沉淀后室温放置 3 min,确保细菌全部裂解,没有块状物。
(二)样品纯化:
1. 将裂解物转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中,然后加入 0.2 倍体积的自备氯仿(0.5mL 裂解液需 0.1mL 氯仿),振荡器上充分振荡混匀 30 s。
2. 12,000rpm 室温离心 3 min,吸取上清到新的离心管中,建议取 400-450uL 上清。
3. 在上清中加入 200-225uL 的无水乙醇,颠倒混匀,加入 RNA 纯化柱中(如有絮状物或沉淀产生,
一并加入纯化柱中)。12,000rpm 离心 1min,弃穿透液。
4. 在纯化柱中加入 0.5mL RNA 洗涤液,室温 12,000rpm 离心 30 s,弃穿透液。
(三)RNA 收集:
1. 将结合有 RNA 的纯化柱 12,000rpm 离心 1min,甩干乙醇。
2. 弃收集管,将柱芯转移到1.5mL的RNase-free离心管中,加入30-50uL RNA溶解液,室温放置 1 min,12,000 rpm 离心 1 min 洗脱 RNA。得到的 RNA 可直接用于后续实验或者 -80℃ 存放。
3. 如果要提高 RNA 产量,加入 30-50uLRNA 溶解液重复洗脱一次,合并两次穿透液;如果要提高RNA 浓度,使用第一次的洗脱液加回到纯化柱中重复洗脱。
注意:建议 RNA 用于下游实验之前,先进行质量检测。经变性琼脂糖凝胶电泳后,会有清晰的 28S和 18S 条带,以及中间弥散的 mRNA 条带,其中 28S 条带是 18S 条带亮度的 1.5-2 倍。有时还包括跑在最前面的较暗的 5S 条带。A260/A280 比值 1.8~2.0 对应 RNA 纯度 90-100%之间。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!