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REPLI-g Mitochondrial DNA Kit

(25)
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  • ¥4940
  • QIAGEN/凯杰
  • 原装进口
  • 151023
  • 2026年01月22日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 英文名

      REPLI-g Mitochondrial DNA Kit (25)

    • 供应商

      QIAGEN/凯杰

    • 规格

      详见说明书

    特点

    • 克服了分离线粒体DNA耗时的问题
    • 从总DNA中选择性扩增线粒体DNA
    • 扩增得到多达4 µg的高纯度线粒体DNA

    产品详情

    REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可从DNA样本中选择性扩增线粒体DNA,无需预先分离线粒体DNA。该试剂盒含有DNA聚合酶、缓冲液和试剂,可利用MDA技术从少量样本中的总DNA中特异性、均一的扩增人类线粒体DNA。这一简便的操作可富集线粒体DNA,且细胞核DNA污染最小,避免进行耗时的线粒体DNA分离纯化,提高了下游分析的灵敏度。

    绩效

    总DNA中一般含有大约0.1%的线粒体DNA(如:1 ng人类总DNA含有1 pg线粒体DNA)。REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可以特异性扩增人类线粒体全基因组,50 µl反应体系可扩增获得大约4 µg高纯度线粒体DNA。这相当于4000万倍的扩增效果,依据起始量会有所不同(参见" Enrichment of mitochondrial DNA")。产物的平均长度一般长于10 kb。
    原理

    常见的获得线粒体DNA的限制之一为需要将线粒体DNA与细胞核DNA分离,在需要提高线粒体DNA标记物分析的灵敏度时尤其如此。分离过程涉及很多耗时的步骤,有可能导致线粒体DNA的损失。REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可在含有总DNA的样本中直接扩增获得线粒体DNA,解决了这一问题。

    REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可快速、高度均一的对线粒体基因组进行全基因组扩增。该方法基于MDA技术,采用新型独特进行性的DNA聚合酶进行等温基因组扩增。REPLI-g DNA Polymerase凭借其活跃的进行性置换反应,可扩增得到100 kb的DNA,无需预先分离DNA。与PCR扩增方法相比,这种方法能很大程度减小序列偏差和不均一位点的出现。

    程序

    使用REPLI-g Mitochondrial DNA Kit扩增线粒体DNA涉及两个基本的步骤(参见" Purified mitochondrial DNA procedure")。首先,将含有总DNA的样本置于REPLI-g mt Reaction Buffer中75°C孵育五分钟,使其变性;通过冷却,使变性停止。然后,加入REPLI-g DNA Polymerase,在33°C开始恒温扩增8小时。应用

    REPLI-g技术扩增获得的线粒体DNA可用于多种下游应用,包括:

    • 基因分型(例如:SNP、缺失、插入)
    • 终点式PCR、real-time PCR 
    • 测序

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