- ￥338
- 博尔森/BIOESN
- BES20870KB
- 中国
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
2×YT liquid Medium（pH7.0）
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
500mL
即用2×YT培养基（pH7.0）
YT培养基可用于多种细菌培养。2×YT培养基浓度比常规LB培养基高，经15psi高压灭菌20min。
实验步骤：
1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 。
2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 。
3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查
4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 。
注意事项：
1.使用琼脂糖需要加温，请做好必要的防护措施，避免烫伤。
2.强烈建议您不要将琼脂糖粉末直接倒入沸水中，这样做会引起爆沸，溅出，致使浓度下降，还会造成结块而融化困难。正确的做法是称量一定量琼脂糖至三角瓶中，根据配制浓度加入一定量的缓冲液(与电泳缓冲液一致)，加盖硅胶塞（防止温度差别造成表面结膜），微波或其他方式加热至沸腾2分钟左右，戴手套小心取出，摇匀，使之完全溶解。
3.必须保证琼脂糖完全溶解，否则造成电泳条带不清，保证完全溶解的前提下，尽量缩短加热时间。
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文献和实验1从微量培养基平皿中挑取单个菌落，接种于5ml 2×YT培养基(17g蛋白胨，10g Bactoyeast,5g NaCl，加水至1 000ml)中，37℃振荡培养过夜。 2取上述过夜菌1∶100稀释接种入500ml新鲜的2×YT培养液中，37℃振荡培养至OD=05~07，约25~3h。 3将上述带有菌液的三角瓶置冰浴15~30min
DNA溶液加入硅化试管中，缓慢加入3.1ml、2mol/L CaCl2 混匀30秒。 ③然后立即混旋，室温下静置30分钟，待溶液轻度混浊后，吹打后即用于转染受体细胞。 (4)转染受体细胞 ①将处于对数生长期已占瓶底50～70% 的受体细胞，在转染前4小时更换一次新鲜培养基，每瓶5ml（25ml培养瓶）。 ②吸取0.5mLDNA-磷酸钙沉淀，加入含5mL培养液的细胞瓶中摇匀。 ③置37℃ 5% CO2 培养24h或更长，使细胞充分吸入DNA-磷酸钙结晶颗粒。 ④更换新鲜培养基
① 制备电泳凝胶(可在前一天下班前进行)。 ② 检查实验计划及试剂。 ③ 预电泳。 ④ 预电泳的同时进行引物退火、链延伸及终止反应。 ⑤ 点样并电泳(根据需要可重复1-2次)。 ⑥ 固定、干燥凝胶。 ⑦ 放射自显影。 2．M13重组子的培养 ① 挑取单一的大肠杆菌集落加入3ml LB培养基中，37℃振荡培养直至A600光密度达到0.8-1.0为止。 ② 取200μl上述大肠杆菌培养物，加入含有2ml 2×YT培养基的试管中，再将插入待测DNA片段的M13单一
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