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文献和实验血液基因组 DNA提取试剂盒操作指南(DP348) ——200μl~1ml 抗凝全血
以下操作按照天根产品 DP348 血液基因组 DNA 提取试剂盒的说明书进行,所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品,样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备:1. 抗凝血 200 μl~1ml抗凝全血2. 移液器及配套无菌枪头(200 μl ,1ml)3. 无水乙醇4. 涡旋振荡器,金属浴/水浴,台式离心机备注:本实验以人血为例,如提取哺乳动物全血可以用此流程,如果禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,红细胞有核细胞,因此处理量为5-20 μl,当处理
多在0.2或者0.5的管子中进行,多数PCR仪也配备了不同的可更换样品槽适配不同的样品管。eppendorf有一个有趣的设计,一个槽内带有0.2和0.5两种不同样品孔,不需更换基座就可以分别使用两种不同的反应管,或者96孔板,加原位适配器就可以变成原位PCR了。避免了换基座的麻烦。当然不同的反应管不可以同时使用的,因为高度不同,热盖不能作用。ABI的9700就可以更换不同的样品槽,样品槽系列扩增到从0.5到标准96孔,到双384孔板,分别适合不同的需要,相当灵活。 软件——新的PCR仪
1mL 细胞染色 buffer,300g 离心 5min,弃上清。 加入100μL 细胞染色 buffer,重悬细胞。 每管加入1mL 的 1× Fixation Working Solution,轻柔混匀,4℃ 避光孵育 30min。 600g 离心 5min,弃上清。 每管加入2mL 的 1×Permeabilization Working Solution,轻柔混匀。 600g 离心 5min,弃上清。 重复(6)、(7)步一次。 七、胞内抗体孵育 加入100μl 的1×
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