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用于免疫沉淀的 免疫磁珠™ 蛋白 G

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  • 2025年11月15日
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      2°C 至 8°C。

    • 保质期

      自生产之日起 24 个月

    • 英文名

      DYNABEADS PROTEIN G 5 ML

    • 库存

    • 供应商

      赛默飞世尔科技

    Dynabeads 蛋白 G 为表面共价偶联有重组蛋白 G(∼17 kDa)的 2.8 µm 均匀超顺磁性微珠。Dynabeads 蛋白 G 为免疫沉淀(IP)提供了可替代 Sepharose 或琼脂糖浆的出色替代产品,手动和自动方案均可用。

    •在不到40分钟内完成 IP
    • 高靶蛋白得率和低抗体消耗
    • 极低非特异性结合及高信噪比
    • 无需色谱柱、离心步骤或耗时的预清洗步骤
    •高重现性和高通量与 KingFisher 仪器兼容

    可快速且简便的进行手动 Dynabeads 分离
    手动方案简单且可在40分钟内完成。首先,靶蛋白的抗体与 Dynabeads 蛋白 G 在试管中孵育 10 分钟。通过将试管置于 DynaMag 磁力架中并去除上清液,洗去过量抗体。然后,抗体包被磁珠可用于多种下游应用,包括 IP、Co-IP、染色质 IP (ChIP)、RNA IP (RIP)、小规模 IgG 纯化和蛋白纯化。由于 Dynabeads 的独特磁性,使用 DynaMag 磁力架可轻松收集结合材料。磁珠上的重组蛋白 G 不含白蛋白结合位点,因此在程序中不会共纯化白蛋白。IP 速度快,并且具有高得率、高重现性且非特异性结合极少,因此无需预清洗步骤。

    自动 Dynabeads 分离有助于提高通量并缩短手动操作时间
    如果您并行处理多份样品,洗涤步骤数量和手动操作时间会与样品数量成比例地增加。一次处理多个样品时,移液管及其他手动操作获得的结果往往不如自动化。为了更好地处理中等至高通量的样品,减少手动操作时间并确保可重现性较高,我们开发了适用于 KingFisher Flex 和 KingFisher Duo Prime 仪器的 IP 方案。自动化方案复制人工方案,从而获得同样高的靶蛋白产率以及相同的低非特异性结合和高可重现性。无论您要处理 10 个还是 96 个样品,IP 方案可在 40 分钟内完成。’只需将试剂加载到孔板上,按下“开始”按钮,到您准备好下游分析时,IP 即可完成。根据抗体和靶蛋白的丰度和/或特异性,可能需要进行一些优化(例如,孵育时间)。

    •使用 KingFisher Duo 仪器进行低到中等通量的处理(1-12 个样品/次)
    •使用 KingFisher Flex 仪器进行高通量的处理(12-96 个样品 /次)
    请参阅自动化方案
    观看 KingFisher Flex 仪器相关视频

    分离温和,对蛋白的物理压力极小
    Dynabeads 蛋白 G 所采用的磁性分离技术快速且温和,对靶蛋白的物理压力极小。这允许分离和浓缩不稳定的复合物,否则在长时间孵育期间可能会被蛋白酶解离或被其破坏。保存天然蛋白构象和大蛋白复合物。

    结合强度和结合能力
    Dynabeads 蛋白质 G 可以分离大多数哺乳动物的免疫球蛋白(Ig)。捕获的 Ig 量取决于起始样品中 Ig 的浓度以及 Ig 的类型和来源。100µL Dynabeads 蛋白 G 将从每毫升含有 20–200µg IgG 的样品中分离出约 25–30 µg 人 IgG。绝大部分位点与 Fc 结合,实现优化的 Ig 取向。抗体与微珠的光滑外表面结合,因而不会像与基于 Sepharose/琼脂糖的微珠结合时一样吸附在大孔中。所有抗体都可用于蛋白结合,因此,仅需加入少量抗体,靶蛋白得率依旧很高。光滑磁珠表面也实现了 Dynabeads 出色的低非特异性结合能力。

    了解有关 Dynabeads 的更多信息
    • Dynabeads 蛋白 A 也可用于内含缓冲液的“即用型”试剂盒
    • 请参阅免疫沉淀选择指南、数据和参考文献
    • 请参阅用于 Dynabeads 分离的磁力架
    • 查找适用于其它应用的 Dynabeads 产品

    OEM 采购
    如需以 OEM 形式采购 Dynabeads 蛋白 A 和蛋白 G 产品,请联系我们对外授权的销售部门和 OEM 销售部门。

    *Sepharose 是 GE Healthcare Bio-Sciences AB 公司的商标。

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    • 免疫沉淀原理

      ,选择膜蛋白B来做阴性对照,只要确认二者之间没有相互作用;而做胞质可溶性蛋白C的免疫沉淀,则选择另外一个可溶性蛋白D来做阴性对照。同时,为避免Protein A或者G beads有(非)特异性吸附从而造成免疫沉淀实验结果的假阳性,一般在加入目的蛋白抗体之前,预先将Protein A或者G beads与细胞裂解液孵育数小时,然后取上清用于后续的抗体-agarose beads孵育。 同时,Protein A或者G beads对不同类型的抗体亲和力不同,结合一抗的种属和Ig亚型,选择合适

    • 用于蛋白质表达和纯化的pET-32α(+)载体的构建

      ,或者可以表达以产生重组蛋白。pET-32α(+)载体系列用于表达与109 aa Trx•Tag硫氧还蛋白融合的肽序列。它属于一种表达系统,可在其激活后产生所需的蛋白质。插入原核宿主细胞。原核细胞如大肠杆菌因为它们廉价,快速的生物量积累和简单的工艺规模扩大,因此是外源蛋白表达的首选宿主。在本文中,我们将重点总结这种在我们的实验室中使用的有用技术。表达后pET-32α(+)载体的构建,蛋白质表达和蛋白质纯化将在本文中详细描述。获得用于构建载体的外源DNA片段插入载体的DNA通常可以使用聚合酶链式反应(PCR

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