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•从体外转录的 RNA 合成更多蛋白
•可在体外和体内更高效地表达 RNA 转录本
•使用随附的多聚腺苷酸尾试剂稳定体内转录本
ARCA 加帽 RNA 更具有翻译活性
ARCA 中的碱基修饰导致其仅以功能性、可翻译的方向掺入;而传统帽类似物被掺入的方向有功能性和非功能性两个方向。因此,将 ARCA 掺入到转录反应中会产生 100% 可翻译的加帽 RNA。在 mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra 转录本中加入了多聚腺苷酸尾,这进一步得到了加强。对比 ARCA 和 ARCA/多聚腺苷酸尾转录本与帽类似物和帽类似物/多聚腺苷酸尾转录本的实验表明,使用 ARCA 加帽 RNA 时蛋白合成水平更高。
什么是 ARCA?
ARCA 是一个经过修饰的帽类似物,其中 3' OH 基团(接近 m7G)被 OCH3 替换(参见示意图)。由于该取代,RNA 聚合酶只能使用剩余的羟基团启动转录,迫使 ARCA 以正向掺入。因此,5' 端与 ARCA 合成的转录本 100% 可翻译,导致对翻译产生强刺激性效应。
对体外转录 RNA 进行正确加帽
对 RNA 进行正确加帽可促进蛋白合成的正确启动,以及体内 mRNA 的稳定性和加工。无帽 RNA 在显微注射或转染到细胞中后会被细胞 RNase 快速降解。加帽 RNA 通常能在体外翻译系统中更高效地翻译,生成了具有仅以功能性方向掺入的帽类似物的 RNA。因此,用ARCA取代传统的帽类似物能保证合成 100% 可翻译的加帽 RNA。
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bp 目的基因序列的 PCR 引物要在正向和反向引物的 5' 端分别添加 Not I 和 Pac I 酶切位点。 ( 3 ) 用 Not I 和 Pac I 酶切 PCR 产物并插入到 γbPDS4 [ 37 ] 中;含有 PDS(八氢番茄红素脱氢酶)基因的载体同样用 Not I 和 Pac I 酶切。 2. 2.2 病毒 RNA 体外转录 使用 mMessage mMachine T7 体外转录试剂盒(Ambion) 合成体外转录产物,并按照产品说明书制备包含有三元
高手进行补充 pET,原核表达金标准(转) pET 载体中,目标基因克隆到 T7 噬菌体强转录 和翻译信号控制之下,并通过在宿主细胞提供 T7 RNA 聚合酶来诱导表达。 Novagen 的 pET 系统不断扩大,提供了用于表达的新技术和选择,目前共包括 36 种载体类型、 15 种不同宿主菌和设计用于有效检测和纯化目标蛋白的许多其它相关产品。 优点 · 是原核蛋白表达 引用最多的系统 · 在任何大肠杆菌 表达系统中,基础
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