- ￥2498
- 博尔森/BIOESN
- BES20249KB
- 中国
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
96 Well Plate for Yeast Plasmid Preps
- 保质期：
两年
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
2P
96孔酵母质粒小提试剂盒（用于PCR及大肠杆菌转化）
保存温度：-20℃保存，开封后根据单品储存条件储存，有效期两年。
产品内容：
产品说明：
1：酵母杂交筛库后，需要对筛选平板的菌落进行鉴定，由于酵母菌细胞壁以及拷贝数的影响，常规的菌 P方法成功率不稳定。
2：本产品在酵母质粒提取 PE051，PE052 以及阳性克隆检测试剂盒 SK2420 的基础上，致力于解决酵母PCR 成功率的问题，成功率可达 100%，并免去玻璃珠震荡带来的人力损耗，一次可以处理 192 个样品，避免了摸索 PCR 条件带来的困扰。
3：一次提取实验，约耗时 90-120min，可以得到 192 个样品的质粒 DNA。所得产物可以满足 PCR 以及大肠杆菌转化实验。
4：本产品提供的酵母培养基为亮氨酸缺陷培养基，适用于 pGADT7 以及 pGADT7-REC 等 leu 筛选标记的质粒菌的扩繁。
实验准备：
1：产品储存：收到产品后，将 96 孔培养板（含 SD-leu 培养基）和提取液置于 4℃冰箱；将酶解液置于-20℃冰箱；其他成分置于室温保存。
2：酵母菌扩繁：将 96 孔培养板（含 SD-leu 培养基）置于超净台中，将平板菌落分别接种于 96 孔中。盖好硅胶盖。于 28-30℃培养至培养基变浑浊（OD 值大于 0.5，约需要培养 12-24 小时）。
提取步骤一（酶解）：
1. 将酶解液置于 37℃溶解（未用完的酶解液可以置于 4℃保存一周，或者-20℃长期保存）。
2. 离心沉淀 96 孔培养板培养所得酵母细胞（根据离心机转调整离心时间至酵母菌完全沉淀）。
3. 在 96 孔培养板每孔加入 200μL 的酶解液重悬酵母菌沉淀，于 37℃摇床（200-250rmp/min）孵育 60min。
注意：30min 时观察一下酵母菌是否沉淀，如沉淀震荡重悬。酶解时间可以延长（2-16h），不影响提取结果。
提取步骤二（裂解）：
1. 将提取液置于 65℃水浴预热备用。
2. 酶解完成后，每孔酶解产物中加入 600μL 的提取液（此时酶解产物会变澄清，总体积为 800μL）。
提取步骤三（纯化）：
1. 准备 96 孔质粒纯化板，置于 96 孔质粒回收板上（暂放，后续回收板用于质粒回收用）。
2. 将裂解产物（每孔 800μL）加入吸附柱中，将 96 孔质粒纯化板转移到用过的 96 孔培养板上（用于废液回收），室温静置 2min。
3. 将 96 孔质粒纯化板（套于 96 孔培养板中）用最高转速离心（例如 4000rmp/min 离心 5min），弃穿透液。
4. 将 96 孔质粒纯化板（套于 96 孔培养板中）每孔加入 600μL 洗涤液用最高转速离心（例如 4000rmp/min离心 5min），弃穿透液。
5. 将 96 孔质粒纯化板（套于 96 孔培养板中）用最高转速离心（例如 4000rmp/min 离心 5min），甩干残留液体。
提取步骤四（收集）：
1. 此时将洗脱液置于 65-85℃水浴预热。
2. 将 96 孔质粒纯化板套于 96 孔质粒回收板上，每孔加入 50μL 的预热的洗脱液，室温静置 3min。
3. 将 96 孔质粒纯化板（套于 96 孔质粒回收板中）用最高转速离心（例如 4000rmp/min 离心 5min）。
4. 穿透液即为所得酵母质粒，取 5μL 用于 50μL 体系的 PCR 反应。取 5-10μL 用于大肠杆菌转化。
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文献和实验Purification Kit 纯化 PCR 产物对比，其中 b 为纯化前 PCR 产物，a 为纯化后产物，M 为 marker。 8. 感受态细胞效率不高？如何制备/选择/保存 制备： 感受态细胞的制备核心步骤包括菌体培养、低温处理、钙离子/电击诱导和分装冻存。实验过程中需注意无菌及低温操作，且需要在大肠杆菌中加入冷冻保护剂（如 10%-15% 甘油或 DMSO），其作用是降低冰点、减少冰晶形成，从而保护感受态细胞的转化效率； 选择： 常见的大肠杆菌感受态细胞有多种，它们具有不同的基因型，通过基因
就是没有，没连上也能知道不是没切开而是别的步骤有问题。连 T 载体也有些麻烦的地方，如需要的切点有时跟 T 载体上自带的切点冲突，这就要小心鉴别；而且连 T 载体最好测序看一下 PCR 的产物对不对、切点对不对。总体来讲连 T 载体是很有优势的。 提质粒 有时手工小提或粗提的质粒酶切效果不好，这可能是提取的不够纯或者内切酶品质不好。所以若酶切效果不佳建议用柱子精提或大提。 酶切 用于连接的酶切很关键。需注意如下几点： ● 如果是双酶切 A 和 B
对照。故障排除1.低产量或无转化体：原因可能是感受态大肠杆菌细胞的转化效率非常低，因此在转化前用空载体DNA检查转化效率。用于转化的过量的连接混合物或用于连接的过量的连接酶也可能导致该问题。在转化之前，确保DNA片段不含有污染物（例如，过量的盐，EDTA，蛋白质，苯酚等），并在结扎前适当地用正确的限制酶消化。2.没有插入的空载体：这可能是由载体再循环或不完全载体切割引起的，试图使载体去磷酸化并检查琼脂糖凝胶上的切割效率可能有助于您解决这个问题。3.插入序列错误：PCR引物中的错误和PCR中使用的低保
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