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无锡云萃生物
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50T/100T/200T
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云萃
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文献和实验/L 6·磷酸萄萄糖(G6P)和9mmol/LNAD(辅酶1)。试验方法分为两步:(1)将10ml血清样品与250pL脂质体(试剂1)混合,作用5min;(2)加入抗体和酶底物(试剂2)125ml,混匀。反应4.5~5min,用自动分光光度分析仪340nm波长测定酶反应物的吸光度。反应过程为试剂2中的抗DNP抗体与脂质体上的抗原(DNP)结合,形成抗原—抗体复合物,血清样品中的补体被激活,攻击并破坏脂质体的膜。脂质体膜溶破后释放出的G-6-PDH与酶底物的G6P和NAD发生反应,产生的NADH
能与底物MUG(分子量352.3,4-甲基伞型酮-β-葡萄糖醛酸苷,4-methylumbelliferylβ-D-glucuronide)反应产生荧光物质MU(分子量198.2,4-甲基伞型酮,4-methylumbelliferone)。MU的激发波长为365 nm,发射波长为456 nm,其含量可由荧光分光光度计测出。因此,我们可以根据单位质量的植物总蛋白在单位时间内产生的荧光物质的多少来定量的检测GUS含量。1.试剂配制(1)1 mol/L Na2HPO4溶液:35.814 g Na2HPO
4 ·2H 2 O);固体磷酸钠(Na 3 PO 4 ) ⑸ 乙醇;蒸馏水;甲醇;考马斯亮蓝;三氯醋酸;丙酮 (6) 溶菌酶标准品;Sephadex G50 ⑺ N-乙酰葡萄糖胺;硫酸铜;硫酸亚铁;硫酸锌;氯化镁;氯化钙;氢氧化钠;盐酸 ⑻ SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 试剂 ;蛋白含量测定(福林法)试剂 ⑼ 聚乙二醇-20000、两性电解质
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