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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
999
- 英文名:
Apoptosis, DNA Ladder Extraction Kit with Spin Column
- 保质期:
12个月
- 供应商:
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
50次
细胞凋亡-DNA Ladder抽提试剂盒(离心柱式)(Apoptosis, DNA Ladder Extraction Kit with Spin Column)是目前的DNA Ladder抽提试剂盒之一。本试剂盒是针对细胞凋亡过程中产生的核小体间DNA链断裂而设计的。可以非常有效地抽提最小片段为180-200bp的DNA ladder,同时又可以抽提到最大50kb左右的基因组DNA。
DNA ladder也称DNA fragmentation,是细胞凋亡的一个重要指标。通常观察到DNA ladder,就可以判定细胞发生了凋亡。
样品首先被蛋白酶K消化,随后加入适合DNA结合到纯化柱上的缓冲液,然后加入到纯化柱内。通过高速离心,使DNA在穿过纯化柱的瞬间,结合到纯化柱上,随后通过两次洗涤去除各种杂质,最后通过洗脱液把DNA洗脱下来。整个过程无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀,样品裂解后仅需约15分钟即可完成。
通过DNA纯化柱方式抽提DNA ladder比用传统的酚氯仿抽提酒精沉淀方法更加便捷,小片段DNA不容易损失。
本试剂盒每次最多可以抽提20mg组织或200-350万个培养细胞。样品用量过多,反而会影响抽提效果。
试剂盒提供了RNase A,可以获得不含RNA的高纯度总DNA,排除了RNA对DNA ladder观察造成的干扰。
纯化柱对于DNA的最大容量约为30微克。通常每200万Hela细胞或500万淋巴细胞可以抽提得到15-25微克总DNA,每 25
mg 肝、脑、肾组织可以抽提得到10-30微克总DNA,每25毫克心、肺组织可以抽提得到5-10微克总DNA,每10mg脾组织可以抽提得到5-30微克总DNA。样品的用量请勿超过纯化柱的容量,样品用量最好能保持在纯化柱容量的70%或以下。当然过少的样品也不利于检测到DNA ladder。
对于培养细胞的凋亡检测,通常6孔板一个孔的细胞就足够用于DNA ladder的抽提和检测。
本试剂盒可以抽提50个样品。
保存条件:
蛋白酶K-20℃保存,其余均室温保存。一年有效。蛋白酶K室温(15-25℃)存放一周,活力无明显下降。
注意事项:
温度较低时样品裂解液A或样品裂解液B中可能会有沉淀产生,属正常现象。使用前必须检查一遍。如有沉淀,55℃水浴孵育使沉淀溶解,混匀后使用。
第一次使用前洗涤液I需添加7ml无水乙醇,洗涤液II需添加24ml无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。
本试剂盒需使用55℃或70℃水浴,请提前作好准备。
除特别说明外,每次Vortex应控制在5-10秒左右。
本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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文献和实验-2等!这也是比较常见的! fffwu:我做的是内皮细胞凋亡,ecv-304,我用的是试剂盒,申能博彩的。dna的提取没问题, 但是我跑不出ladder,我用的是40v,1小时,胶的浓度是1。5%, midas:增加时间到3h,胶的浓度可以减少到0.8-1.0% lxh_lily:做过几次DNA ladder了,光镜下看到50%的细胞都脱落了,但是电泳结果只能看到一大片很亮的拖带,不能分出一条一条的ladder,我用的是1.2%的琼脂糖凝胶,恒流,60mA。是不是用page电泳效果会好一点? midas
发生细胞凋亡时,内源性核酸酶被激活,染色体DNA链在核小体之间被切割,形成180~200个碱基或其整数倍的DNA片段,将这些DNA片段抽提出来进行电泳,可得到DNA梯状条带(DNA ladder)。 一、材料与试剂 凋亡细胞; 蛋白酶K(500μg/ml) 8mol/L 醋酸钾 白细胞裂解液:pH8.0,10mmol/L Tris-HCl,10mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA,1% SDS。 氯仿 无水
发生细胞凋亡时,内源性核酸酶被激活,染色体DNA链在核小体之间被切割,形成180~200个碱基或其整数倍的DNA片段,将这些DNA片段抽提出来进行电泳,可得到DNA梯状条带(DNA ladder)。 一、材料与试剂 凋亡细胞; 蛋白酶K(500μg/ml) 8mol/L 醋酸钾 白细胞裂解液:pH8.0,10mmol/L Tris-HCl,10mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA,1% SDS。 氯仿 无水乙醇,70%乙醇; 2%琼脂
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