植物原生质体转染试剂盒

产品简介

植物原生质体转染试剂盒(Plant Protoplasts Transfection Kit)，可用于将质粒、Cas9/sgRNA等蛋白和RNA转染进入植物原生质体内，经转染的植物原生质体经过一定时间培养后，可用于检测外源基因的表达和功能，或者转染后的基因下调、基因敲除或基因编辑效果等。

对于拟南芥原生质体，使用本试剂盒转染质粒后通常2-6小时可以检测相关基因的转录变化(mRNA等RNA的变化)，通常2-16小时后可以检测到相关蛋白表达的变化，通常24小时可以检测到基因编辑的效果。

植物原生质体是开展一系列植物细胞研究的重要材料，可以用于如将DNA、RNA或者蛋白通过电击法(electroporation)、显微注射(microinjection)或聚乙二醇法介导的转染(PEG-mediated transfection)等。本试剂盒采用的是一种优化的聚乙二醇转染方法，借助聚乙二醇短时间内对原生质体产生的冲击效应，使质粒DNA、RNA或蛋白得以进入原生质体，具有使用便捷、转染效率高等优点。

本试剂盒可与生产的植物原生质体分离试剂盒(C0362)配合使用，完成一些模式生物如拟南芥原生质体外源基因的短时间或长期表达或者内源基因的关闭、下调或编辑等。

使用本试剂盒将植物EGFP表达质粒转染拟南芥原生质体的效果如图1所示。图中可见可以获得非常高的转染效率。

图1. 使用植物原生质体转染试剂盒(Plant Protoplasts Transfection Kit)转染拟南芥原生质体的效果图。(C0362)获得的拟南芥叶片原生质体，参考如下体系制备转染试剂溶液：称取0.48g转染试剂于2ml离心管(FCT121)中，加入300μl溶液A、480μl溶液B，颠倒混匀，使转染试剂充分溶解后备用(足够用于10个后续的10个样品的转染)。在2ml的圆底离心管(FTUB019)中加入20μg p35SPPDK-EGFP-Flag (植物用绿色荧光蛋白) (D2627)，加入100μl制备好的原生质体，轻柔混匀后加入110μl当日配制好的转染试剂溶液，轻柔混匀，室温静置5min后加入440μl终止液，轻轻颠倒混匀，室温100g离心1min，去除上清，再加入0.5ml终止液，轻柔重悬原生质体，室温100g离心1min后，尽量去除上清，收集原生质体。加入1ml培养液，小心重悬原生质体后将其平置25℃培养过夜(约16h)，次日于荧光显微镜下检测EGFP荧光信号。上图为实际检测的明场和荧光照片。

一个小包装(C0563S)的本试剂盒可以用于相当于6孔板100个孔的样品，12孔板200个孔的样品，或24孔板400个孔的样品的转染。一个中包装(C0563M)的本试剂盒可以用于相当于6孔板500个孔的样品，12孔板1000个孔的样品，或24孔板2000个孔的样品的转染。
保存条件：

-20℃保存，一年有效。转染试剂可以室温或4℃保存。1-2周内多次使用可以4℃保存。

注意事项：

请按照试剂盒要求的保存条件存放相关试剂，使用时请将各溶液充分融解并混匀。

本试剂盒使用时，需要按照无菌操作要求规范进行，避免微生物污染。培养液可适当分装后保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！