Mitochondrial Membrane Potential and Apoptosis Detection Kit with Mito-Tracker Red CMXRos and Annexin V-FITC
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12个月
供应商:
上海博尔森生物科技有限公司
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-20℃
规格:
20次/50次
规格:
20次
产品价格:
¥725.0
规格:
50次
产品价格:
¥1283.0
产品简介
线粒体膜电位与细胞凋亡检测试剂盒(Mitochondrial Membrane Potential and Apoptosis Detection Kit with Mito-Tracker Red CMXRos and Annexin V-FITC)是一种联合使用线粒体膜电位依赖性的红色荧光探针Mito-Tracker Red CMXRos(也称MitoTracker Red CMXRos)和细胞凋亡绿色荧光探针Annexin V-FITC来检测培养细胞的线粒体膜电位和细胞凋亡的红绿荧光双染试剂盒。红色荧光标记的是保持线粒体膜电位的活细胞,而绿色荧光标记的是发生了凋亡或坏死的细胞。同时试剂盒还提供了用于细胞核荧光染色的Hoechst 33342染色液,便于在有需要的时候同时通过细胞核的碎裂和致密浓染等从形态学上观察细胞凋亡。 本试剂盒使用便捷,结果清晰。本产品同时检测线粒体膜电位变化和磷酯酰丝氨酸外翻两个重要的凋亡检测指标。本试剂盒检测后,活细胞绿色荧光阴性,但红色荧光阳性;而凋亡细胞绿色荧光阳性,同时红色荧光显著减弱或者呈现阴性,活细胞和死细胞的红绿荧光对比非常鲜明(参见图1),可以使用荧光显微镜、流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。需要指出的是,红色荧光染色在诱导凋亡或坏死后会逐渐减弱,但部分红色荧光减弱的细胞不一定绿色荧光染色阳性。需要指出的是,磷酯酰丝氨酸外翻是细胞凋亡的早期事件,在凋亡早期不一定会出现细胞核碎裂或致密浓染等细胞凋亡时细胞核的形态学变化。
图1. 本试剂盒检测正常细胞、凋亡细胞的效果。Vehicle组为正常培养的HT-29(人结肠癌细胞)细胞,细胞能被线粒体红色荧光探针Mito-Tracker Red CMXRos染色,但Annexin V-FITC绿色荧光染色阴性;HT-29 (C6410)细胞经过TNFα+SM-164 (TS)处理5小时后,一些凋亡的细胞绿色荧光呈现阳性,同时红色荧光显著减弱或者呈现阴性。图中的蓝色荧光为Hoechst 33342染色。TNFα+SM-164是一种细胞凋亡诱导试剂盒(C0006S)。实际检测效果会因实验条件、检测仪器的不同而存在差异,本图仅供参考。 细胞凋亡(Apoptosis)是生物体发育等生命过程中普遍存在的、由基因决定的细胞主动有序的死亡方式。当细胞遇到内、外环境因子刺激时,启动基因调控的自杀保护措施,去除体内非必需细胞或即将发生特化的细胞。在这一过程中,细胞脱落离体或裂解为若干凋亡小体,并迅速被巨噬细胞或邻近细胞清除,这是一种由基因控制、高度有序的细胞自主死亡,包含一系列信号事件组成的通路。细胞凋亡失调与多种疾病有关,例如阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)和癌症等。 细胞凋亡通过特征性的形态学和生物化学变化而区别于坏死(Necrosis),包括细胞皱缩、细胞核皱缩、核膜核仁破碎等等。在正常活细胞中,磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine,简称PS)位于细胞膜的近细胞质面。而在凋亡细胞中,PS从质膜的内部外翻到细胞表面即细胞膜外侧,从而使PS暴露于细胞外部。在白细胞的凋亡过程中,白细胞表面的PS标记可以被巨噬细胞识别,从而最终被巨噬细胞吞噬。人血管抗凝血剂Annexin V是一种35-36kDa Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,对PS具有高亲和力。用带有绿色荧光的FITC标记的Annexin V (Annexin V-FITC)染色细胞,就可以通过荧光显微镜、激光共聚焦显微镜或流式细胞仪等荧光检测设备非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。需要指出的是对于坏死细胞,由于细胞膜的完整性被破坏,位于细胞膜内侧的PS也会被Annexin V-FITC染色。 Mito-Tracker Red CMXRos (线粒体红色荧光探针)是一种具有细胞通透性的X-rosamine衍生物(Chloromethyl-X-rosamine,简称CMXRos),能够特异性地标记细胞中具有生物活性的线粒体。对于正常细胞,Mito-Tracker Red CMXRos可以把其中的线粒体染色为明亮的红色荧光,而当细胞发生凋亡等时,线粒体膜电位下降,此时线粒体的红色荧光会逐渐减弱,甚至呈现红色荧光阴性。 本试剂盒检测的是Mito-Tracker Red CMXRos的红色荧光和Annexin V-FITC的绿色荧光。同时本试剂盒提供Hoechst 33342,Hoechst 33342是一种具有细胞膜通透性的蓝色荧光染料,对细胞的毒性较低,是一种优秀的活细胞细胞核染料。Hoechst 33342、Annexin V-FITC和Mito-Tracker Red CMXRos的激发光谱和发射光谱参考图2。
图2. Hoechst 33342、Annexin V-FITC和Mito-Tracker Red CMXRos的激发光谱与发射光谱。