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- YLKBIO
- YLK-PCR0361
- 国产
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Pseudorabies Virus, Porcine Circovirus type II and Porcine Respiratory and Reproductive Syndrome Virus Mutant Type Detection Kit （Real-Time PCR Method）
- 保质期：
9个月
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
猪伪狂犬通用/猪圆环 2 型/高致病性猪蓝耳病病毒（PRV-gB/PCV-2/PRRSV-M）核酸检测试剂盒（三重荧光 PCR 法）
【产品名称】
通用名称：猪伪狂犬通用/猪圆环 2 型/高致病性猪蓝耳病病毒（PRV-gB/PCV-2/PRRSV-M）核酸检测试剂盒（三 重荧光 PCR 法）
Name ： Pseudorabies Virus, Porcine Circovirus type II and Porcine Respiratory and Reproductive Syndrome Virus Mutant Type Detection Kit （Real-Time PCR Method）
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
高致病性猪蓝耳病、猪圆环病、伪狂犬病病毒是猪繁殖性障碍的主要病原。.严重危害养猪业，对于早期鉴
别诊断病及时了解流行状况对控制这 3 种疾病尤为重要。
本试剂盒适用于检测标本中的高致病性猪蓝耳病病毒、猪圆环病毒 2 型和伪狂犬病毒，适用于这 3 类病原的
辅助诊断及流行病学调查。
【检验原理】
本试剂盒针分别对高致病性猪蓝耳病病毒NSP2、猪圆环病毒2型和伪狂犬病毒gB的基因保守区基因设计特异
性引物和探针，用荧光PCR技术对猪蓝耳病病毒NSP2、猪圆环病毒2型和伪狂犬病毒gB的核酸进行体外扩增检测，
用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
包装规格
50T/盒
PRV-gB/PCV-2/PRRSV-M 反应液
500μL×2 管
酶液
50μL×1 管
PRV-gB/PCV-2/PRRSV-M 阳性质控品
50μL ×1 管
阴性质控品
250μL ×1 管
说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 9 个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、RocheLC480、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
病死或扑杀的猪，取脑、肺、淋巴结等组织；待检活猪，用注射器取血 5mL。
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，
严禁反复冻融。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理
组织样品：称取样品约 1g，用手术剪剪碎后于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后
转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；全血样品待血凝后取
血清 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2 核酸提取
推荐采用优利科（上海）生命科学有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请按照
试剂说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N（N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管
数每满 10 份，则多配制 1 份），每测试反应体系配制如下表：
试剂
PRV-gB/PCV-2/PRRSV-M 反应液
酶液
用量（样本数为 N）
20μL
1μL
将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21μL/管。
3. 加样（样本处理区）将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短
暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；
荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM，CY5、VIC， 淬灭通道（Quencher Dye）选择 NONE，ABI
系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置：
步骤
循环数
温度
时间
收集荧光信号
1
1 cycle
42℃
20 min
否
2
1 cycle
95℃
10min
否
3
40 cycles
94℃
15sec
否
55℃
30sec
是
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像
调节 Baseline 的 start 值（一般可在 3~15 范围内调节）、stop 值（一般可在 5~20 范围内调节），以及 Threshold 的
Value 值（上下拖动阈值线至高于阴性对照），重新分析结果。
5.2 结果判断
FAM 通道为伪狂犬病毒检测结果，CY5 通道为猪圆环病毒 2 型检测结果，VIC 通道为高致病性猪蓝耳病病毒
检测结果
阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；
可疑：检测通道 35<Ct 值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为 35<Ct 值≤38，且曲线有明显的增长曲线，
判定为阳性，否则为阴性；
阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。
6. 质控标准
阴性对照：Ct 值>38 或无 Ct 值。；
阳性对照：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32；
以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7. 检测方法的局限性
1.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
2.样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
3.阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
4.病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
5.不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
6.试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
7.本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
1.所有操作严格按照说明书进行；
2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3.反应液应避光保存；
4.反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7.实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理
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文献和实验器是HPLC仪的三大关键部件之一。其作用是把洗脱液中组分的量转变为电信号。HPLC的检测器要求灵敏度高、噪音低（即对温度、流量等外界变化不敏感）、线性范围宽、重复性好和适用范围广。 1．分类 1）按原理可分为光学检测器（如紫外、荧光、示差折光、蒸发光散射）、热学检测器（如吸附热）、电化学检测器（如极谱、库仑、安培）、电学检测器（电导、介电常数、压电石英频率）、放射性检测器（闪烁计数、电子捕获、氦离子化）以及氢火焰离子化检测器。 2）按测量性质可分为通用型和专属型（又称选择
1）按原理可分为光学检测器（如紫外、荧光、示差折光、蒸发光散射）、热学检测器（如吸附热）、电化学检测器（如极谱、库仑、安培）、电学检测器（电导、介电常数、压电石英频率）、放射性检测器（闪烁计数、电子捕获、氦离子化）以及氢火焰离子化检测器。 2）按测量性质可分为通用型和专属型（又称选择性）。通用型检测器测量的是一般物质均具有的性质，它对溶剂和溶质组分均有反应，如示差折光、蒸发光散射检测器。通用型的灵敏度一般比专属型的低。专属型检测器只能检测某些组分的某一性质，如紫外、荧光检测器，它们只对有紫外吸收或荧光
计数、电子捕获、氦离子化）以及氢火焰离子化检测器。 2）按测量性质可分为通用型和专属型（又称选择性）。通用型检测器测量的是一般物质均具有的性质，它对溶剂和溶质组分均有反应，如示差折光、蒸发光散射检测器。通用型的灵敏度一般比专属型的低。专属型检测器只能检测某些组分的某一性质，如紫外、荧光检测器，它们只对有紫外吸收或荧光发射的组分有响应。 3）按检测方式分为浓度型和质量型。浓度型检测器的响应与流动相中组分的浓度有关，质量型检测器的响应与单位时间内通过检测器的组分的量有关。 4）检测器还可分为破坏
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