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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
1年
- 英文名:
pCS2-3×FLAG
- 库存:
200
- 供应商:
优利科(上海)生命科学有限公司
- 规格:
质粒干粉
产品名称:pCS2-3×FLAG质粒
别称:
产品规格:质粒干粉
有效期:90天,请尽快转化。
保存温度:一般在-20℃,置于-80℃保存时间更长。
运输方式:常温运输,1周内。
应用领域:科研
启动子:CMV
复制子:pUC
感受态:DH5a
培养温度:37度
质粒宿主:哺乳细胞,鱼类
质粒用途:蛋白表达
片段类型:ORF
片段物种:人
注意事项:转化前请准确查找该质粒相应的抗性、感受态和培养温度。(请向客服QQ索要质粒信息目录)


使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
| pFUPI AoT5Cyp猫头鹰猴基因质粒 |
| pPH37酵母基因质粒 |
| pET28a-PPK大肠基因质粒 |
| pTXB1-Tn5大肠基因质粒 |
| pAX01-PPK大肠基因质粒 |
| pMA2775大肠基因质粒 |
| pdnaKp-EGFP大肠启动子质粒 |
| pcDNA-4mtD3cpv基因质粒 |
| pBAV1k-T5-LUX基因质粒 |
| pTE-10M0X其它基因质粒 |
| pSR58.6蓝藻基因质粒 |
| pTA7002-avrPto番茄基因质粒 |
| pE6c荧光基因质粒 |
| pSK+KanaRpsL抗性基因质粒 |
| pCY 3010-07抗性基因质粒 |
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文献和实验liuruya 问别人要了个带GFP-tag(GFP-N2载体)的质粒,目的基因1.4kb,分子量约52kD,转染293T细胞能见荧光,WB杂不出来,设置了阴性和阳性对照证实不是WB的技术问题。后来又换了个flag-tag,仍然杂不出来WB。仔细检查过序列,不存在移码的问题,非常费解。有同学分析是空间位阻问题,不知换个tag是不是能解决这个问题。有同学遇到过这种问题么,或者帮忙分析一下可能的原因。谢谢!!! zhuqueleee
(Figure 2). Data generated from this assay is currently in submission. Procedure Part I: Detection of Flag-tagged proteins binding 5´ biotin labeled siRNAs in vitro 1.A minimum of ~4.0×106 cells are required/sample and clearly the more cells to begin
入 DMSO 或 2-巯基乙醇,混合后加入 L 连接反应液 (含重组质粒),温和混匀,置冰上 30 min;2. 42 ℃ 水浴 45 秒,然后迅速放回冰中 1~2 min;3. 加入 2 mL LB 培养液,37 ℃ 轻摇荡培养 1 h;4. 4,000×g 离心 10 秒钟,弃上清,用 LB 培养液重悬菌体;5. 将菌液铺于含有适当抗生素的 LB 琼脂培养板上,涂匀,室温放置 20~30 min,倒置于 37 ℃ 孵箱中培养 12~16 h。(三)转化细胞的筛选【实验原理】1、 蓝白筛选:以 TA










