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文献和实验10% 胎牛血清。细胞培养物均根据 ATCC 的建议使用标准细胞培养方法维持和收获。 球状体形成的初始接种密度取决于细胞类型、球状体形式的生长期持续时间以及分析时球状体所需尺寸等因素。为更好地评估球状体的形成和生长,使用 96 孔球形微孔板在每孔 100 µL 生长培养基中以 40、200、1,000、5,000 和 10,000 个细胞的密度进行接种。通过CellTiter-Glo® 3D细胞活力测定法在 0、24、48 和 72 小时分别对球状体培养物进行分析。上述所有细胞系采用同一接种
人 iPS 细胞体外分化为气道上皮肺类器官用于呼吸系统疾病研究应用以及iPSC操作指南
请参阅分析证书。 6. 将细胞以200 x g离心2分钟。去除并倒掉上清液。 7. 添加适量的培养基(例如,6孔板每孔1.5 - 2 mL)以准备培养容器。 8. 轻拍15 mL离心管,以使细胞沉淀脱离,然后轻轻加入1 mL适当的培养基,并接种到包被的6孔板的2个孔中(如果使用其他培养形式,或者如果分析证书另有说明,则相应加以调整)。请勿过度吸取细胞,否则会因为单细胞悬液的生成而造成细胞活力下降。 9. 轻轻左右和前后摇动板,以使细胞均匀铺展在整个孔中。 10. 建议在解冻后立即、48小时、以及约
x 106/ml; 3.4 加入1 000 U/ml 的重组人IFN-g培养; 3.5 24h 后加入50ng/ml 的CD3 单克隆抗体和300 U/ml 的重组人IL-2,刺激CIK 细胞的生长和增殖; 注:此时也可同时加入100 U/ml的重组人IL-1a。 3.6 每3天半量换液或扩瓶一次,并补加重组人IL-2 300 U/ml; 3.7 在培养的第7d,收获CIK细胞,此时数量应达到1x 109个以上。 3.8 CIK细胞质控: 3.8.1 台盼蓝染色检测细胞活力
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