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Annexin V-FITC/
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100
Annexin V-FITC/7-AAD
无
1年
优利科(上海)生命科学有限公司
4℃
1×10⁶cells/T25培养瓶
产品使用说明: 本试剂盒中Annexin V Binding Buffer(10×)为10×浓缩液,实验前用去离子水稀释成1×工作液。 例如:取1mL Annexin V Binding Buffer(10×),加入去离子水定容至10mL即可。实验操作指南步骤: 1. 细胞按照实验方案进行凋亡诱导,300g离心5min,弃上清,收集细胞,PBS洗涤一次,轻轻重悬细胞并计数。 注:本品仅在悬浮培养的细胞中验证,良好的细胞状态是实验的关键。贴壁生长的细胞用于凋亡检测时,可能会因为胰酶消化、吹打等处理导致细胞的坏死或凋亡,对实验结果可能存在不可控的影响,请谨慎处理。 2. 取1-5×10^5重悬的细胞,300g离心5min,弃上清。用PBS洗涤细胞一次,离心后弃上清,加入500μL稀释的1×Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。 3. 细胞悬液中加入5μL的Annexin V-FITC和5μL的7-AAD染色液。 4. 轻柔涡旋混匀后,室温避光孵育15-20min。 5. 反应完成后立即上机检测。如不能及时检测,请于冰上避光静置并于1小时内完成检测。保存条件: Annexin V-FITC和7-AAD染色液需要避光保存;7-AAD染色液适当分装后-20℃可保存1年,其他试剂4℃可保存1年。注意事项: 1. 为获得最佳的使用效果,请在3-6个月内使用,Annexin V-FITC禁止冷冻保存; 2. 染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加; 3. 荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存; 4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。Annexin V-FITC/7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒(本试剂产品仅供科学研究或进一步生产使用,不可用于临床诊断或治疗)1、 细胞传代:1)细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时,弃 25cm2 培养瓶中的培养液,用 PBS 清洗细胞一次;2)添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至 15ml 离心管中, 1000rpm 离心 5min;3)弃上清,沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬,然后按 1:2 比例进行分瓶传代,最后放入 37℃, 5%CO2 细胞培养箱中培养;2、 细胞冻存:1)细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时,弃 25cm2 培养瓶中的培养液,用 PBS 清洗细胞一次;2)添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至 15ml 离心管中, 1000rpm 离心 5min;3)用适量的冻存液(FBS: DMSO=9 : 1)重悬细胞,并放置于冻存管中;4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜, 24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。3、细胞复苏:1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入 37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁;2)将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中, 1000rpm 离心 5min;3)弃上清,沉淀用 6ml 完全培养基重悬,接种 25cm2 培养瓶,于 37℃, 5%CO2 细胞培养箱中培养Annexin V-FITC/7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒
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1533 人阅读发布时间:2021-11-28 17:29
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