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- YLKBIO
- YLK-XB2004
- 上海
- 2025年12月02日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系：
/
- 细胞类型：
细胞系
- 肿瘤类型：
/
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 库存：
100
- 英文名：
E2；AE-2
- 生长状态：
悬浮细胞
- 年限：
永久
- 运输方式：
快递形式
- 器官来源：
/
- 是否是肿瘤细胞：
/
- 细胞形态：
淋巴母细胞样
- 免疫类型：
/
- 物种来源：
人
- 相关疾病：
/
- 组织来源：
/
- 规格：
1×10⁶cells/T25培养瓶
细胞中文名称：AE2小鼠杂交瘤细胞(抗AChE))（带STR鉴定）
| 名称 | AE-2 (小鼠杂交瘤细胞(抗AChE)) |
| 别称 | E2 |
| 种属 | 小鼠 |
| 组织来源 | B淋巴细胞；淋巴瘤 |
| 生长特性 | 悬浮细胞 |
| 细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
| 背景描述 | 用纯化的人红细胞乙酰胆碱脂酶免疫实验动物，并将脾细胞与SP2/O-Agl4骨髓瘤细胞融合。产生的抗体与人及猴的乙酰胆碱脂酶结合，但AE-2细胞反应位点与AE-1的抗原决定簇不同。检测发现AE-2细胞短肢畸形(鼠痘)病毒阴性。 |
| 生长培养基 | DMEM＋10% FBS＋1% P/S |
| 推荐传代比例 | 3×10^5－1×10^6cells/mL |
| 推荐换液频率 | 2~3次/周 |
| 冻存条件 | 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度：液氮 |
| 培养条件 | 气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃ |
| 注意事项 | 该细胞为悬浮细胞，请注意离心收集细胞悬液；请勿直接倒掉细胞培养液。 |
| 保藏机构 | ATCC; HB-73 |
1、 细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养
液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃， 5%CO2 细胞
培养箱中培养；
2、 细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终
止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）用适量的冻存液（FBS： DMSO=9 ： 1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜， 24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序
降温盒可直接放入-80℃。
3、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结
晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2 培养瓶，于 37℃， 5%CO2 细胞培养箱中培养
AE2小鼠杂交瘤细胞(抗AChE))（带STR鉴定）收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液移入废液缸中，悬浮细胞需离心处理，加入6ml新鲜完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤说明书。
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文献和实验1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交瘤细胞既可产生抗体，又可无性繁殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度精确的新纪元。 免疫细胞化学的 技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体，由于每种抗原都有几个抗原决定簇，用它免疫动物将产生对各个决定簇的抗体，即多克隆抗体。单克隆抗体则是由一个产生抗体的细胞与一个骨髓瘤细胞融合而形成的杂交廇细胞经无性繁殖而来
，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。 点此查看完整实验步骤 6. 单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。 （1）体内诱生法 取Balb/c小鼠，首先腹腔注射0.5 ml液体石腊或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量
度高，操作简便，是一种理想的检测方法。本试验旨在研制出抗APT的单克隆抗体，以检测出人血浆中APT的水平，建立灵敏、特异的检测方法。 1 材料与方法 1.1 免疫用抗原：经生化处理，从服用华法令的羊血浆中提取、纯化APT，经SDS-PAGE鉴定为单一区带，分子量为72 kD，并与已知抗体发生特异性反应。 1.2 杂交瘤细胞的制备：用纯化的APT免疫Balb/c小鼠，共3次，每次间隔2 w，200 μg/(次*只)，免疫第3次后10 d尾静脉取血测效价，效价达1∶
