溶藻弧菌快速检测试剂盒（恒温荧光法）

【检测原理】 利用两对特殊引物和具有链置换活性的 Bst DNA 聚合酶，使模板两端引物结合处循环出现环状 单链结构，引物顺利与模板结合并进行链置换扩增反应，实现在恒温条件下（60~65℃）进行连 续快速扩增。反应加入显色指示剂，阴阳性结果显色差异显著，可直接通过颜色变化判读结果。 【产品特点】 1. 快速简便：将酶、引物等反应组分混匀后进行干粉化处理，增加试剂稳定性，使用时减少 溶液配制步骤，更为便捷，整个检测反应可在 1 h 内完成； 2. 特异性高：利用靶基因序列上的多个独立区域设计多条引物，保证扩增反应的高度特异性； 3. 灵敏度高：最低检验限达到 10 CFU/Test； 4. 判读简单：反应前加入显色指示剂，反应后通过肉眼观察反应液颜色变化或者经荧光监测 仪器跟踪荧光图谱的变化判读结果，直观方便，且可有效避免反应后开盖造成的气溶胶污 染。 【储存条件与保质期】 2~8℃条件下储存，有效期为 12 个月 【适用仪器】 1. PCR 仪器或金属浴恒温器。 2. 高速离心机，用于样品前处理。 【样品类型】 增菌液、可疑菌落样品以及 DNA 样品等。 【使用指南】 1. 样品前处理 A. 样品增菌液模板 DNA 的制备： a) 取取 25 g 待检样品置于 225 mL PDB 增菌肉汤中，36 ℃±1 ℃增菌 8~12 h。该步骤也可依 照实验室自行建立的方法进行增菌。 b) 取以上增菌液 1 mL 到 1.5 mL 规格的无菌离心管中，6000 r/min 离心 5 min，完全去除上清； c) 加入 30 μL 裂解液充分悬浮管底沉淀，轻弹管壁消除气泡，99℃加热 10 min。 d) 12000 r/min 离心 15 min，上清即为待测样品 DNA，静置冰上，长时间不用应再次离心。 B. 可疑菌落模板 DNA 的制备： 挑取可疑菌落半环到含 30 μL 裂解液的无菌离心管，充分悬浮后按照上述步骤 c)、d)操作。 2. 试剂混合、加样 A. 阴、阳性对照复溶 首次使用时，加入 80 μL 超纯水至阳性对照和阴性对照冻干粉中，待溶解后混匀，-20℃存 储待用。 B. 干粉试剂复溶、加样 1) 取出冻干粉试剂，按照需求剪取 n 个检测试剂管（n=待检测样品数+1 管阳性对照+1 管阴性 对照），每管加入复溶液 20 μL； 2) 向上述已加入复溶液的 n 个反应管中各加入显色指示剂 2.5 μL； 3) 向上述 n 个反应管中依次分别加入阴性对照、待测样品 DNA、阳性对照各 2.5 μL，每个加 样后立刻盖紧盖子。 3. 扩增反应 使用能够提供恒温条件的仪器（有热盖功能优先），设置温度到 64℃，放入检测管恒温反应 50 min。 4. 结果判读 反应结束后在自然光线充足的环境条件下，将样品置于白色背景下观察，阴性对照检测管呈 淡橙色，阳性对照检测管呈荧光绿，待测样品反应管以此作为对照进行判读，若阴阳对照反 应管任一结果与上述情况不符，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品技术支持联系。 【注意事项】 1. 检测空间应严格分区操作，在空间条件允许情况下，试剂配置区用于配置反应所需要的所 有试剂；样品前处理区用于待测样品的核酸提取和模板的加入；扩增观察区用于反应进行 和结果判读。各区内空间独立，试验用品专用，避免交叉污染。另外，样品处理区建议配 备超净工作台，并且所有步骤严格按照说明书的要求进行。 2. 检测过程中建议穿洁净工作服，带一次性手套，使用的枪头需提前灭菌。 3. 干粉检测试剂在使用前低速离心，确保所有的干粉沉在管底，加入复溶液后尽量避免产生 气泡，反应前检查反应管是否盖紧，避免泄露造成污染。 4. 阳性对照可能会作为污染源，污染其他试剂和待检样品，导致出现假阳性结果，在加样过 程中建议最后加入阳性对照反应管。 5. 使用显色指示剂时，在反应结束后切忌开盖，以防气溶胶污染。 6. 本试剂盒仅用于食品和环境中样品的检测。 7. 本试剂盒是基于核酸的分子检测，因此并非只能检出唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的活菌，判定 结果有时会与传统培养法不同，如需辨明活菌样品存在，请用传统微生物检验方法进行确 证。 8. 试剂盒中反应管材质为聚丙烯，包装盒材质是纸，使用完毕废弃时按照医疗废弃物相关规 定处理，由使用者自行负责处理。 9. 不同批号的产品请勿混合使用，请在有效期内使用试剂盒，由于操作不当引起的误判，以 及有此误判引发的其他事项，本公司概不负责。
 
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