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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
NLS-Cas9 H840A Nickase
- 规格:
50ug
目录号:E377-01A
产品描述:
本制品是spCas9 Nuclease的一个突变体。Cas9 Nuclease具有两个切割活性中心,从而实现在sgRNA靶序列特定位点引入DNA双链断裂(DSB)。Cas9 H840A Nickase在Cas9 Nuclease基础上突变其中一个切割活性中心,其能在sgRNA靶序列所在的DNA链上产生切口,从而形成功能性的单链断裂。并且通过在蛋白两端加了核定位信号(NLS),可使蛋白进入细胞核内进行基因组编辑。Cas9 H840A Nickase配合一对gRNA使用,可实现Cas9 Nuclease相同的基因编辑效果,由于有效的识别序列由20 bp增加至40 bp,可明显减少意外的脱靶基因修饰,从而显著提高CRISPR/Cas9技术基因修饰的特异性。
产品特点:
纯蛋白体系,避免CRISPR基因敲除时引入质粒或病毒干扰;
可显著降低脱靶效应。
产品用途:
基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲除;
基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲入;
sgRNA剪切靶点DNA效率检测,降低体内筛选成本;
体外剪切靶DNA的特异位点。
保存温度:
-20℃保存,或-80℃长期保存。
应用实例:
Cas9 H840A Nickase DNA切割活性检测:
带有靶位点的超螺旋DNA(cccDNA);
酶切产生切刻后的开环DNA(ocDNA);
50 -100 ng酶可有效切割cccDNA(>95%)。

For research use only.
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文献和实验-like (N-terminal RNase H fold) domain and the HNH(McrA-like) domain, each responsible for cleavage of one strand ofthe duplex DNA molecule. Therefore, there are two different versionsof Cas9 that can be used for genome modifi cation, the wildtype Cas9
CRISPR/Cas9 系统作为细菌和古细菌的获得性免疫系统, 通过 RNA 介导特异性的切割外源遗传物质, 用以对抗入侵的病毒和质粒。利用 Cas9 来摧毁入侵 DNA 的 Type Ⅱ CRISPR/Cas 系统, 可以在体外进行基因的编辑。为了提高CRISPR/Cas9 的特异性,使用 Cas9 切口酶和一对 sgRNA,两个相近的切口造成 DNA 双链断裂, 诱导细胞发生非同源末端连接修复, 造成目的基因的突变。利用 CRISPR/Cas9 进行基因的编辑,首先要构建有效的 sgRNA
CRISPR-Cas9 全程实操教程:从 gRNA 设计到挑单克隆全程指导
基本原理CRISPR-Cas9 是一种细菌获得性免疫,用于降解入侵的外源 DNA。CRISPR RNA (crRNA) 与转录激活 crRNA (Trans-activating crRNA, tracrRNA) 退火形成的复合物能特异性识别与其互补的基因组序列,引导 Cas9 核酸内切酶在目的片段生成 DNA 双链断裂,如下图所示。通过基因工程手段对 crRNA 和 tracrRNA 进行改造,将其连接在一起得到 sgRNA (single guide RNA)。通过将表达 sgRNA
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