PB-Cuo-MCS-IRES-GFP-EF1-CymR-P

人APC和TSC－2 cDNA的长5＇RACE

cDNA的5＇末端，利用TRIZOL®试剂，按照使用说明操作来分离HeLa S3细胞的总RNA，并增加用乙酸铵/乙醇来沉淀总RNA。5＇RACE中使用的引物，包括精简的锚定引物（Abridged Anchor Primer，AAP）和精简的通用扩增引物（Abridged Universal Amplification Primer，AUAP），以及TSC-2和APC的GSP如表1所示，引物名字上的数字代表引物3＇碱基在已发表序列中的位置，并在AAP序列的5＇端进行一些调整，所用的引物都由GIBCO

cDNA合成技术

Promega公司的RibocloneR M-MLV(H- ) cDNA合成系统采用M-MLV反转录酶的RNase H缺失突变株取代AMV反转录酶，使合成的cDNA更长。该系统的第一链合成使用M-MLV反转录酶，cDNA第二链合成采用置换合成法，采用RNaseH和DNA聚合酶Ⅰ进行置换合成，最后用T4 DNA聚合酶切去单链末端，方法简便易行。该系统试剂包括：20μg 特异性引物 200μl M-MLV第一链缓冲液(5×)，配方如下: 250mmol/L Tris·Cl pH8.3(37℃时

全长cDNA文库的构建

分子生物学研究尤其是病毒研究的过程中，通常要构建cDNA文库。分子克隆（第二版，中文版）介绍的方法一般不能得到全长的cDNA文库；T*****公司的产品目录介绍了一个试剂盒，但是据认为效率不是很高（非本人观点，本人目前还没有做过cDNA文库）。下面这篇文章讲的是一种新的技术，因此将之介绍给大家，但愿对各位有所帮助。 首先声明的是，本人在这里不是为某些公司做广告，请勿误会！！！ 文章来源：www.ebiotrade.com 科研社区 SMART技术回顾 发布日期:2002