FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽Actin-TrackerGreen(微丝绿色荧光探针)产品图

FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽Acti

n-TrackerGreen(微丝绿色荧光探针)
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      北京诺博莱德科技有限公司

    FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽

    Actin-TrackerGreen(微丝绿色荧光探针)

    目录号:D811033

    规格:300T

    保存:4℃干燥避光保存12个月

    产品简介:

    鬼笔环肽(Phalloidin)是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanitaphalloides)的环状七肽毒素,以高亲和力(Kd=20nM)选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin,而不会与单体肌动蛋白G-actin结合,通常用来标记组织切片,细胞培养物或无细胞体系中的F-actin,从而对F-actin进行定性和定量分析。另外,鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维,无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞,按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略,染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此,鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白(Actin)抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小,直径约12-15Å,分子量<2000Daltons,未标记肌动蛋白(Actin)的许多生理特性都得以维持,比如,同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNaseI等仍能发生反应;鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质;以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。

    鬼笔环肽(Phalloidin)的结合阻止丝状肌动蛋白(微丝)的解离,稳定微丝结构,从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度(CC)降至<1µg/mL,因此,可用作一种聚合促进剂。此外,鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。

    本品为FITC标记的鬼笔环肽,染色反应特异性强,对比性高,具有比Actin抗体更好的染色效果,适合用作F-actin的定性和定量检测。另外,经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性,适用性广泛。本产品是冻干粉形式。

    试剂盒组份: 

    Cat.No:

    ProductName

    Size

    Storage

    D811033

    FITCPhalloidin FITC标记鬼笔环肽

    Actin-TrackerGreen(微丝绿色荧光探针)

    300T

    -20°CProtectfromlight  1year

    MW:1177.3 

    最大激发/发射波长(Ex/Em)

    Ex495~496nm; Em513~516nm

    外观(Appearance)

    黄色粉末(冻干粉)

    溶解性(Solubility)

    溶于DMSO、DMF、甲醇或者yijing水溶液(20%)

    多肽序列(Sequence) FITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3to6)

    产品组成:

    产品名称

    目录号

    规格

    FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽

    D811033

    300T

    使用手册

    D811033sc

    1份

    产品参数:

    Name

    FITCPhalloidinFITC标记鬼笔环肽Actin-TrackerGreen(微丝绿色荧光探针)

    Cat.no:

    D811033

    Storage:

    -20°CSealed&desiccated&Minimizedlightexposure&

    MinimizedFreezingAndThawing!

    Shelf Life:

    24 months

    使用方法(仅供参考):

    1.染色液的配置

    (1)母液的配置:使用前将本品回温至室温并简短离心,加入30uLDMSO使其充分溶解,混匀即可获得1000×FITC标记鬼笔环肽母液。根据实验情况,对其分装并于-20℃避光干燥保存。

    (2)工作液的配置:吸取1µL以上FITC标记鬼笔环肽母液至1mLPBS(含1%BSA)缓冲液中即可得到1×工作液。

    【注】:不同的细胞染色情况不同,相应FITC鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。

    2. 染色步骤

    (1)细胞爬片生长>24h,使其密度达到50~60%汇合度。

    (2)吸掉培养液,37℃预热的1×PBS(pH7.4)清洗细胞2次。

    (3)使用溶于PBS的4%jiaquanrongye进行细胞固定,室温固定10~30min。

    注意:避免固定剂中含有甲醇成分,因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

    (4)室温条件下,用PBS清洗细胞2~3次,每次10min。

    (5)室温条件下,用bingtong(≤-20℃)脱水或者用0.5%TritonX-100溶液透化处理5min。

    (6)室温条件下,用PBS清洗细胞2~3次,每次10min。

    (7)取100µL/孔(96孔板)配制好的 FITC标记鬼笔环肽工作液,覆盖住盖玻片上的细胞,室温避光孵育30min(通常情况下,4℃~37℃孵育皆可)。

    注意:为了降低背景,可于FITC标记的鬼笔环肽工作液内加入1%BSA;另外,孵育过程中为了避免溶液挥发,可将盖玻片转移到一个密封的容器内。

    (8)用PBS清洗盖玻片3次,每次5min。

    (9)使用100µL/孔(96孔板)即用型DAPI溶液(浓度:100nM)对细胞核进行复染,约30s。

    (10)用PBS清洗盖玻片,然后倒置在已经滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片剂的载玻片上。使用纸巾轻轻檫掉多余封片剂,然后用指甲油永久封片。此法制备的标本玻片可置于4℃避光保存,通常6个月内可继续做F-actin染色分析。

    (11)荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察,选择FITC激发/发射滤片(Ex/Em=496/516nm)和DAPI激发/发射滤片(Ex/Em=364/454nm)。

    需要自备材料

    1.甲醇

    2.×PBS缓冲液,pH7.4, 细胞培养级别 

    3.固定液4%duojujiaquan(溶于PBS缓冲液) 

    4.bingtong或透化液0.5%TritonX-100(溶于PBS缓冲液)

    5.Fluoromount-GTM 水溶性封片剂(不含DAPI),DAPI 

    6.DAPIFluoromount-GTM 水溶性封片剂(含DAPI)

    7.BSA,标准级别 

    8.载玻片和盖玻片

    9.盖玻片周围密封液(如透明指甲油)

    10.组装有FITC激发/发射滤片,以及DAPI激发/发射滤片的荧光显微镜或共聚焦显微镜。

    注意事项:

    1.荧光标记鬼笔环肽的一个单位 (T) 的定义:按照推荐工作液浓度200nM ,每次用量为100μL 染色工作液时,可以检测的次数300次;按照工作液浓度100nM ,每次用量为200μL 染色工作液时,可以检测的次数也是300次。

    2.鬼笔环肽具有毒性,需小心操作。

    3.本产品为冻干粉形式,微量不易观察 使用前瞬时离心,加溶剂溶解后使用, 溶解后接近无色。

    4.本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅!

    5.本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程!

     

    备注:产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息和纸板说明书为准。(版本V0.5)

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