Recombinant Sortase (2A.9) pro

表达体系：大肠杆菌
蛋白质种属来源：S. aureus

注意：
文末提供的技术数据表（TDS）仅反映该特定批次的重组蛋白数据；具体的缓冲液含量和蛋白质浓度，请以您订购的具体批次的技术数据表为准。


背景介绍
Sortase属于一类转肽酶，利用活性部位的半胱氨酸硫醇通过识别和裂解苏氨酸和甘氨酸残基之间的羧基末端sorting信号LPXTG（其中X为任何氨基酸）来修饰蛋白质。Sortase 2A.9是来自Staphylococcus aureus 的野生型Sortase的工程变体，其活性明显高于野生型Sortase，用于对含有LAXTG识别序列（其中X是任何氨基酸）的抗体或蛋白质进行定点标记。可轻易地贴上各种标签，如肽、DNA、碳水化合物或含有聚甘氨酸序列（Gly）n（其中n=3个或更多的甘氨酸残基）的荧光团。Sortase 2A.9受美国专利保护（专利号10,202,593）。


应用说明
Sortase 2A.9可识别抗体或经基因工程设计的含有LAXTG图案的蛋白质，其中X为任何氨基酸。Sortase 2A.9在苏氨酸和甘氨酸残基之间裂解该序列，然后末端的甘氨酸被任何聚甘氨酸（G）n标签取代，以附着HRP、生物素、荧光团和其他标签。Sortase A2.9可用于各种标签应用和条件。一些建议使用的缓冲液如下。

反应缓冲液：300 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 5 mM CaCl2, pH 7.5
终止液：500 mM EGTA，pH 8.0。


蛋白质详情
重组Sortase 2A.9蛋白，含有相对于Sortase A5 pentamutant（S. aureaus，Uniprot A0A077UNB8-1）的下列氨基酸替换。S102C, A104H, E105D, K138P, K152I, N160K, K162H, T164N, K173E, I182V, T196S。该蛋白在大肠杆菌中表达，包括一个C端6xHis标签。


蛋白质序列：
MQAKPQIPKDKSKVAGYIEIPDADIKEPVYPGPATREQLNRGVCFHDENESLDDQNISIAGHT
FIDRPNYQFTNLKAAKPGSMVYFKVGNETRIYKMTSIRKVHPNAVEVLDEQEGKDKQLTLVTC
DDYNEETGVWESRKIFVATEVKGSHHHHHH

该蛋白的计算分子量为17.8kDa，观察分子量约为20kDa。


重组Sortase 2A.9 SDS-PAGE凝胶
1.5 µg Sortase 2A.9蛋白在4%到12%的梯度凝胶上运行，然后用Coomassie蓝染色。

计算分子量：17.8 kDa
观察到的分子量：20 kDa


重组Sortase（2A.9）蛋白对LAETG序列的特异性
将12纳克/微升的Sortase（2A.9）与0.4mM LAETG、LPETG或LPESG底物在反应缓冲液中孵化，然后在裂解后进行荧光检测。结果证明了Sortase（2A.9）对LAETG的高特异性。2A.9对WT底物LPETG显示出最小的活性，对突变的底物LPESG没有活性。

储存
溶液中的重组蛋白对温度敏感，必须储存在-80℃以防止降解。避免反复的冷冻/解冻循环，不储存时要放在冰上。