Recombinant Sortase A5 protein

表达体系：大肠杆菌
蛋白质种属来源：S. aureus

注意：
文末提供的技术数据表（TDS）仅反映该特定批次的重组蛋白数据；具体的缓冲液含量和蛋白质浓度，请以您订购的具体批次的技术数据表为准。


背景介绍
Sortase属于一类转肽酶，利用活性部位的半胱氨酸硫醇通过识别和裂解苏氨酸和甘氨酸残基之间的羧基端识别信号LPXTG（其中X为任何氨基酸）来修饰蛋白质。Sortase A5是来自S. aureus的野生型Sortase的一个工程化的五变体，其活性明显高于野生型Sortase。当显示LPXTG识别序列时，Sortase A5可对抗体或蛋白质进行定点标记。可轻松贴上各种标签，如肽、DNA、碳水化合物或含有聚甘氨酸序列（Gly）n（其中n=3个或更多甘氨酸残基）的荧光体。Sortase A5 Pentamutant受美国专利保护（专利号9,267,127）。


应用说明
Sortase A5可识别含有LPXTG图案（其中X为任何氨基酸）的抗体或基因工程蛋白。Sortase A5可在苏氨酸和甘氨酸残基之间裂解该序列，然后用任何聚甘氨酸（G）n标签替换末端甘氨酸。Sortase A5用于Active Motif的Sortag-IT™标记试剂盒，将HRP、生物素、荧光剂和其他标签直接附着在Active Motif的AbFlex™重组抗体（rAb）上。野生型和Sortase A5五聚体蛋白的活性都依赖于Ca2+，因此，Active Motif的Sortag-IT标记缓冲液和试剂的配方中都含有Ca2+，以实现最佳的蛋白质标记。此外，我们的AbFlex重组抗体是在HEPES缓冲液中提供的，它不结合Ca2+，不会干扰Sortase A5的酶活性。


蛋白质细节
重组Sortase A5蛋白（S. aureaus，Uniprot A0A077UNB8-1），含有P94R、D160N、D165A、K190E和K196T的氨基酸替换，在大肠杆菌中表达，包括一个C端6xHis标签。该蛋白的分子量为17.8kDa。

蛋白质序列
MQAKPQIPKDKSKVAGYIEIPDADIKEPVYPGPATREQLNRGVSFA EENESLDDQNISIAGHTFIDRPNYQFTNLKAAKKGSMVYFKVGNETRKYKMTSIRNVKPT 
AVGVLDEQKGKDKQLTLITCDDYNEETGVWETRKIFVATEVKLEHHHHHH


重组Sortase A5蛋白对LPETG序列的特异性
将Sortase A5与LPETG、LAETG或LPESG底物在反应缓冲液中孵化，然后在裂解后进行荧光检测。结果表明，Sortase A5对LPETG的特异性很高，对底物LPESGK的活性很小，对变异底物LAETG没有活性。


Sortase A5的标记效率与野生型Sortase相比
与野生型Sortase相比，Sortase A5的标记效率提高。 H3K9Ac AbFlex抗体（67 µg）用5 µg Biotin（1.28 mM）标记，使用1 µg Sortase A5或野生型Sortase，在30℃下振荡2小时。顶部面板。纯化后，将0.25和0.125微克标记的抗体在SDS-PAGE PAGE凝胶上运行，并使用链霉蛋白-HRP检测标记。  泳道1和2：分别为0.25微克和0.125微克的H3K9Ac AbFlex Ab与野生型Sortase标记。泳道3和4：分别用0.25 µg和0.125 µg的H3K9Ac AbFlex Ab与Sortase A5标记。
下方图表：使用BioRad的Gel Doc成像系统对标记的强度进行量化，这里表示为任意单位。



储存
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