猪乙脑病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

猪乙脑病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

【产品名称】
通用名：猪乙脑病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Japanese Encephalitis Virus （ELISA）
【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【预期用途】 猪乙型脑炎又名日本乙型脑炎是由猪乙脑病毒（Porcine Japanese Encephalitis Virus，JEV）引起的一种蚊媒性、急性人畜共患传染病，病猪主要表现为妊娠母猪流产、产死胎，公猪睾丸肿。
本试剂用于检测猪血清中猪乙脑病毒抗体，可用于猪乙脑病毒疫苗免疫效果评价。
【原    理】
    本试剂盒由预包被猪乙型脑炎病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪乙型脑炎病毒抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪乙型脑炎病毒抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪乙型脑炎病毒抗体。

【试剂盒组成】

序号	名称	规格/96T×1	规格/96T×2	规格/96T×5
1	酶标记物	11ml×1(红盖)	11ml×2(红盖)	26ml×2(红盖)
2	样品稀释液	50ml×1(黄盖)	50ml×1(黄盖)	200ml×1(黄盖)
3	20X浓缩洗涤液	40ml×1(白盖)	40ml×1(白盖)	200ml×1(白盖)
4	底物液A	6ml×1(白盖)	11ml×1(白盖)	26ml×1(白盖)
5	底物液B	6ml×1(黑盖)	11ml×1(棕盖)	26ml×1(黑盖)
6	终止液	6ml×1(黄盖)	11ml×1(黄盖)	26ml×1(黄盖)
7	阳性对照	1.0 ml×1(红盖)	1.5 ml×1(红盖)	2.0 ml×1(红盖)
8	阴性对照	1.0 ml×1(绿盖)	1.5 ml×1(绿盖)	2.0 ml×1(绿盖)
9	酶标板	96T×1	96T×2	96T×5
10	盖板膜	1	2	5
11	自封袋	1	1	2
12	说明书	1	1	1
13	稀释板	1	2	5

【储存及有效期】 2～8℃保存，有效期12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。     
【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀，盖好盖板膜，置37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。
5.甩去孔内液体，每孔加350 ul工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值），无参比波长用空白孔调零(即所有孔吸光值减去空白孔吸光值)。
【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照≤0.10，阳性对照≥0.6。
【检验结果的解释】
1.样品A值≥0.38为阳性；样品A值在0.2到0.38之间为可疑；样品A值＜0.2为阴性。
2.本实验结果为阴性或可疑时表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。
【试验方法的局限性】
    该试验仅作为定性检测猪血清、血浆中猪乙型脑炎病毒抗体，根据A值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。