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- 服务名称:
miRNA 3' UTR 靶标克隆
- 提供商:
GeneCopoeia
- 规格:
<500bp/500bp~2kb/2kb~3kb/靶标克隆对照
| 规格: | <500bp | 产品价格: | ¥2500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 500bp~2kb | 产品价格: | ¥3500.0 |
| 规格: | 2kb~3kb | 产品价格: | ¥4500.0 |
| 规格: | 靶标克隆对照 | 产品价格: | ¥750.0 |
GeneCopoeia提供哺乳动物表达载体的人、小鼠、大鼠miRNA 3' UTR克隆,可用于miRNA靶标验证、预测靶标的功能确证和miRNA对靶标的调控作用的研究。
本公司提供两套3'UTR报告载体。
1、pEZX-MT05载体
我们将3'UTR序列(源于公开的基因序列数据库)插入到Gaussia荧光素酶报告基因下游,在哺乳动物细胞中由SV40启动子驱动转录生成 Gaussia荧光素酶(Gluc)和3'UTR靶标序列的嵌合mRNA。因此无需裂解细胞即可实时监测Gluc的表达,从而达到研究mRNA-miRNA相互作用的目的。
另外,可选择载体上带有分泌型碱性磷酸酶(SEAP)的报告基因。CMV启动子驱动转录的SEAP作为同质粒内的对照,这种双报告系统可以对多样本常规转染进行精确比较。
2、pEZX-MT01载体
这是Firefly/Renilla双荧光素酶报告载体。3'UTR序列在Firefly(hLuc)荧光素酶报告基因下游,CMV启动子驱动转录的Renilla(hRLuc)作为同质粒内的对照。通过裂解细胞检测hLuc和hRLuc的表达。
您可选择双荧光素酶或单荧光素酶载体在细胞裂解或不破坏靶标细胞的状态下进行实验。
产品优势
- 覆盖面广:覆盖人类(23000)、小鼠(19000)和大鼠(8000)基因
- 简单的系统设计:3' UTR靶标序列插入在firefly或Gaussia荧光素酶下游,当miRNA复合体与3' UTR靶标特异结合时,荧光素酶的表达受到抑制
- 方便的双报告载体:载体中的两个报告基因,一个可用于检测调节作用,另一个可用作内参和信号校对。排除了同时转染两个不同报告基因质粒的需要。
- 活细胞分析
可使用配套的试剂盒进行简单定量(点击即可进入产品页面):
对细胞裂解物中的荧光素酶活性进行简单定量:firefly荧光素酶,非分泌型
对细胞上清中的荧光素酶活性进行简单定量:Gaussia荧光素酶,分泌型
更多产品信息请点击:http://www.igenebio.com/product/mirna-inhibitor/
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文献和实验型启动子(CMV、Ubi等)终止转录的情况。载体系统也分多种,包括慢病毒载体、腺病毒载体、质粒载体等。瞬时过表达方式主要是经过人工化学修饰的运用化学方法合成的双链RNA,能模拟细胞中内源性成熟miRNA的高水平表达,以增强内源性miRNA的调控作用,进行功能获得性研究。只需直接转染进入细胞,即可检测功能变化,快速,方便。miRNA靶位点鉴定:目前最为常用的miRNA靶位点鉴定方法是荧光素酶报告基因法。其基本原理是首先构建荧光素酶表达载体,将希望鉴定的miRNA靶基因的3′UTR构建到荧
miRNA和3个潜在的目标靶基因完全互补(这些scarecrow基因编码潜在的转录因子),尽管目前还不清楚这些基因是否就是miRNA的目标靶,这仍是第一次发现miRNA和其潜在的目标靶完全互补,也提示miRNA可能包含和siRNA类似的作用方式。 识别miRNAs的方法 多个研究小组采用生物化学结合是生物信息学的方法开展对miRNAs的研究工作。由于据推测都是由Dicer酶降解RNA得到的,21―23个碱基大小、有5'端磷酸基和3'羟基的RNA片断,有的实验室采用改良的定向克隆方法来筛选具有相同特征
的mirVana离心柱试剂盒来富集小RNA组分。 Q2:你如何有效克隆miRNA? Peng Jin(埃默里大学) 它取决于克隆miRNA的目的。如果是miRNA发现或高通量测序,我们会使用5’和3’接头连接,来产生小RNA库。如果是已知的miRNA,我们想了解它的表达,一般会用PCR扩增包含目的miRNA的DNA片段,然后在适当的载体上验证它的表达。 Winston Kuo(哈佛大学) 在克隆miRNA时,有几个问题。如果你想克隆miRNA周围
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